中医辨证治疗难治性丙型肝炎疗效观察及中医证型与T淋巴细胞亚群关系的研究

【摘要】慢性丙型肝炎是一个严重危害人类健康的公共卫生问题。据WHO统计全球丙型肝炎病毒（HCV）感染率3%,约1.7亿人，每年新发丙肝3.5万例。根据2010年9月国家卫生部公布的最新流行病学调查结果显示，我国抗HCV阳性率为0.43％，大概全国HCV感染者达500多万。HCV自然感染史长，其慢性化率为50%～85%。肝硬化和肝癌是慢性丙型肝炎患者的主要死因，在感染的5～0年后30%～40%将发展为肝硬化，10～20年后5%～7%发展为肝癌。成为现今严重危害人民健康的传染病之一。尽管现代医学在慢性丙型肝炎的治疗上取得一些突破性进展，其三联疗法成为基因1b型等一些难治性丙肝的最新方案。但对于耐药、抗病毒无效者及在治疗中出现药物毒副作用、停药后复发、病毒学突破、部分应答、无效应答或无应答、基因1型或4型HCV感染、高病毒载量(HCVRNA≥1.5×106IU/mL)、合并其他病毒感染,或同时合并其他如糖尿病、甲状腺功能障碍、血友病、器官移植、肾脏疾病及血液透析等自身免疫功能障碍有关的疾病及肝硬化失代偿期等问题的存在，使得丙肝治疗依然是临床难题，即所谓的难治性慢性丙型肝炎。目前由HCV基因1型感染所致的慢性丙型肝炎在我国约占78%,高病毒载量的慢性丙型肝炎约占69%,所以可以说在我国大多数的慢性丙型肝炎属于难治性丙型肝炎。RHC形成复杂，因而其临床表现也多种多样。通过“十一五”对CHC中医症候辨证分型规范研究显示：正虚邪恋、肝郁脾虚、肝肾阴虚三型占所有证型的73%，故虚实夹杂的临床表现是CHC的主要特征，若不实行临床干预，任其进一步发展，必将形成肝硬化等难治性肝病，其预后不佳，对患者生命将形成极大的威胁，对治疗造成巨大的挑战。在RHC治疗方面，并无特别有效的方法。聚乙二醇化a干扰素(PEG-IFN-a)联合利巴韦林进行优化治疗或标准方案联合蛋白酶抑制剂对基因1型的治疗仍然是当前的首要选择。但是由于干扰素、利巴韦林及蛋白酶抑制剂具有难以适应的毒副作用，使RHC治疗更为困惑。因此，进一步探求难治性丙型肝炎免疫发病机制及寻找其治疗的有效方案是医学和临床的迫切需求，中医药以其独特优势，在防治慢性丙型病毒性肝炎方面积累了丰富的经验。从传统的辨证论治、专病专方专药、针灸、单药、民间验方，发展到现在的中西医结合治疗方案，都有中医药作出的贡献。多年的研究也证实，中医药在慢性丙型肝炎的防治中不仅可以缓解患者症状，减轻肝脏炎症，而且能抑制或抗病毒，逆转肝脏早期肝纤维化，减轻西药的毒副作用，延缓其慢性化，增强机体免疫，提高患者生活质量，以达到延长生存期，预防肝硬化、肝癌等终末期肝病，意义重大。目的：本研究在“十一五”慢性丙型肝炎证候规律及中西医结合治疗方案研究的基础上，依托国家“十二五”难治性丙型肝炎的中医药治疗方案，以中药辨证方（益气解毒方、疏肝健脾方、补肾柔肝方）治疗难治性丙型肝炎，观察其临床疗效、转氨酶和HCVRNA转阴率及下降率（HCVRNA下降2log），并对其免疫功能与转氨酶、病毒载量以及中医证型与T淋巴细胞亚群、HCVRNA等相关性进行研究，运用计算机统计学软件进行数据处理和综合分析，以探讨中药辨证方对难治性丙型肝炎的临床疗效以及RHC的病毒载量、肝脏炎症、免疫调节机制与中医证型之间的相关性，以便进一步提高难治性丙型病毒性肝炎的临床治疗水平。方法：实验分三个部分进行第一部分：中医药辨证方治疗难治性丙型肝炎的疗效观察将54例难治性丙型肝炎患者随机、对照分为试验组28例和对照组26例。试验组给予中药辨证方：益气解毒方、疏肝健脾方、补肾柔肝方治疗，对照组给予中药安慰剂治疗。治疗12，24，36，48周后观察并比较2组血HCVRNA阴转率和下降率、肝功能变化及2组中医症状积分变化。第二部分：难治性丙型肝炎患者外周血T细胞亚群分析与病毒载量相关性研究对153例难治性丙型肝炎感染者按基因1b、抗病毒治疗阴转后复发及肝硬化分成3组，分别采用流式细胞术和荧光定量PCR技术分别检测外周血中T淋巴细胞亚群(CD3+T、CD4+T、CD8+T、CD4+T/CD8+T)和HCVRNA载量。另选同期健康体检者150人外周血中T淋巴细胞亚群作为对照组。第三部分：难治性丙型肝炎中医证型与T淋巴细胞亚群及HCVRNA载量等相关性研究对153例RHC患者进行中医证型研究,用流式细胞仪检测其患者和150例正常健康对照者外周血T淋巴细胞亚群变化，荧光定量PCR检测患者RHCRNA含量、基因分型和肝功能检测，观察肝功能、血清RHCRNA载量及T淋巴细胞亚群指标与中医证型之间的关系。结果：第一部分：中医药辨证方治疗难治性丙型肝炎的疗效观察与对照组比较中药辨证方（益气解毒方、疏肝健脾方、补肾柔肝方）组能明显降低转氨酶水平、提高HCVRNA阴转率和下降率（P＜0.05)。第二部分：难治性丙型肝炎患者外周血T细胞亚群分析与病毒载量相关性研究1与对照组相比RHC患者组CD3+T、CD4+T下降有统计学意义（p＜0.05），而CD8+T、CD4+T/CD8+T无统计学意义（p＞0.05）。2高病毒载量患者组与对照组相比较CD3+T、CD4+T下降有统计学意义（P＜0.05），而CD8+T、CD4+T/CD8+T变化无显著差异（P＞0.05），低病毒载量患者组与对照组比较CD8+T下降有统计学意义（P＜0.05）。RHC高病毒载量患者组与低病毒载量患者T淋巴细胞亚群比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。3抗病毒治疗阴转后复发组与对照组比较CD3+T、CD4+T、CD8+T下降明显，差异有统计学意义（P＜0.05）。4肝硬化组与对照组比较CD3+T、CD8+T下降明显，而CD4+T/CD8+T升高明显，差异有统计学意义（P＜0.05）。5基因1b组与对照组相比较CD4+T、CD8+T下降明显，差异有统计学意义（P＜0.05）。6治疗阴转复发组与肝硬化组无统计学意义，与基因1b型比较CD3+T、CD8+T下降明显，差异有统计学意义（P＜0.05）。7肝硬化组与基因1b型组比较CD3+T、CD8+T下降明显、而CD4+T/CD8+T升高明显，差异有统计学意义（P＜0.05）。第三部分：难治性丙型肝炎中医证型与T淋巴细胞亚群及HCVRNA载量等相关性研究1难治性丙型肝炎常见的中医证型依次为正虚邪恋、肝郁脾虚、肝胆湿热、瘀血阻络、肝肾阴虚及脾肾阳虚等六型。2ALT水平与中医证型的关系：即ALT从高到低在各证型中的排列顺序为：湿热中阻型、脾肾阳虚型、肝肾阴虚型、瘀血内阻型、肝郁脾虚型、正虚邪恋型，其湿热中阻型与其他证型相比较ALT明显升高，差异有统计学意义(P＜0.05)；AST水平与中医证型的关系：即AST从高到低在各证型中的排列顺序为：脾肾阳虚型、湿热中阻型、瘀血内阻型、肝肾阴虚型、肝郁脾虚型、正虚邪恋型，其中脾肾阳虚型与与其他类型相比较明显升高，差异有统计学意义(P＜0.05)；ALB与中医证型的关系为：脾肾阳虚型ALB与其他中医类型明显降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。3RHCRNA水平与中医证型有一定规律性，即湿热中阻型＞正虚邪恋型＞肝肾阴虚型＞瘀血内阻型＞肝郁脾虚型＞脾肾阳虚型；湿热中阻型与瘀血内阻型、脾肾阳虚型相比较，RHCRNA明显升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。4T淋巴细胞亚群指标(CD3+T、CD4+T、CD4+T/CD8+T)与中医辨证分型有一定相关性，与正常对照组相比较湿热中阻型CD8+T明显升高（P＜0.01），CD4+T/CD8+T明显下降（P＜0.05）；脾肾阳虚型和肝郁脾虚型与正常对照组相比较CD3+T、CD4+T明显下降（p＜0.01），CD8+T明显下降（P＜0.05）；正虚邪恋型、瘀血内阻型、肝肾阴虚型与正常对照组相比较(CD3+T、CD4+T、CD4+T/CD8+T)差异无统计学意义(P＞0.05)。5在各证型相比较中脾肾阳虚型T淋巴细胞计数明显下降，与正虚邪恋型、湿热中阻型、瘀血内阻型、肝肾阴虚型差异有统计学意义（P＜0.05）；肝郁脾虚型T淋巴细胞计数明显下降，与湿热中阻型、肝肾阴虚型差异有统计学意义（P＜0.05）；肝胆湿热型T淋巴细胞计数明显升高，与瘀血内阻型、脾肾阳虚型比较差异有统计学意义（P＜0.05）；CD4+T/CD8+T明显下降，与瘀血内阻型比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：1、中药辨证方能改善难治性丙型病毒性肝炎肝脏炎症，且具有一定的抗病毒作用。2、长期慢性HCV感染会引起机体细胞免疫功能低下和免疫功能紊乱，可能是基因1b型、抗病毒治疗阴转后复发及肝硬化形成难治性的主要原因之一，RHC患者病毒载量高，病毒复制活跃，肝脏炎症亢进，免疫功能低下及免疫紊乱程度随HCV载量增高而逐渐加重。3、RHC中医证型依次为正虚邪恋型、肝郁脾虚型、湿热中阻型、瘀血内阻型、肝肾阴虚型及脾肾阳虚型等六型;4、RHC转氨酶、病毒载量及T淋巴细胞亚群与中医证型有一定相关性。
【作者】陈文林；
【导师】杨大国；
【作者基本信息】湖北中医药大学，中医内科学，2014，博士
【关键词】难治性慢性丙型肝炎；中药辨证方；T淋巴细胞亚群；中医证型；转氨酶；HCVRNA载量；

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