肾阳虚对实验大鼠血脂的影响及其机制研究

【摘要】目的：本研究立足于肾主气化的理论，以肌注氢化可的松复制肾阳虚大鼠模型为平台，观察模型大鼠的血脂变化，以肾阳虚高脂血症对LXR-α蛋白表达的影响为切入点，探讨LXR-α蛋白及其调控的JAK2/STAT3信号转导通路与肾阳虚高脂血症大鼠血脂影响的相关机制，并观察右归丸对肾阳虚模型大鼠有关血脂相应指标的影响。通过检测其TG、TC、LDL-C和HDL-C的含量，JAK2、STAT3、LXRα、SREBP-1c、FAS、ABCA1和CETP基因的mRNA及蛋白表达等相关指标的变化，旨在从LXRα蛋白表达调控细胞内的信号通路来初步阐明肾阳虚导致高脂血症的机理。方法：采用8周龄SD大鼠60只，雄性，随机分为正常对照组、模型组和右归丸治疗组三组。除正常对照组外，其余各组大鼠每天均采用肌注氢化可的松方法复制肾阳虚大鼠模型。正常对照组大鼠每天上午8:00肌肉注射生理盐水1ml/200g体重，其余组大鼠每天上午8:00肌肉注射氢化可的松1ml/200g（药物浓度为5mg/ml），持续15天；从第16天开始，右归丸组大鼠灌胃右归丸混悬液2ml/200g（药物浓度为0.243g/ml），其余组大鼠灌胃生理盐水2ml/200g，均持续30天。所有动物在实验的第16天和第46天分别放入相应标记的代谢笼中，取24小时尿液；在第16天于尾动脉取血，第46天断头取血，然后剪开大鼠腹壁，分离肝脏，并进行相关指标检测：①检测24小时尿17-OH-CS及血清睾酮（T）的含量；②检测TG、TC、LDL-C和HDL-C的含量；③检测肝指数的变化，并观察肝组织的形态学改变；④免疫组织化学染色法检测肝组织中LXRα蛋白的表达；⑤检测大鼠肝组织JAK2、STAT3、LXRα、SREBP-1c和FASmRNA及蛋白免疫印迹法检测SREBP-1c和FAS蛋白表达。⑥检测第46天血浆中ABCA1和CETPmRNA及蛋白免疫印迹法检测ABCA1和CETP蛋白表达。结果：①24小时尿液及血清T含量检测结果：第16天与正常对照组比较，模型组和右归丸组大鼠尿液17-OH-CS及血清T含量显著降低（P<0.01），模型组和右归丸组比较无明显差异。第46天与正常对照组比较，模型组大鼠尿液17-OH-CS及血清T含量显著降低（P<0.01）；与模型组比较，右归丸组大鼠尿液17-OH-CS及血清T含量显著升高（P<0.01）。②血清TG、TC、LDL-C、HDL-C含量检测结果：第16天与正常对照组比较，模型组和右归丸组大鼠血清TG、TC、LDL-C显著升高（P<0.01），HDL-C含量显著降低（P<0.01）；模型组和右归丸组比较无明显差异。第46天与正常对照组比较，模型组大鼠血清TG、TC、LDL-C显著升高（P<0.01），HDL-C含量显著降低（P<0.01）；与模型组比较，右归丸组大鼠血清TG、TC、LDL-C含量显著降低（P<0.01），HDL-C含量显著升高（P<0.01）。③肝指数检测结果：与正常对照组比较，模型组大鼠肝指数明显增加（P<0.05），右归丸组大鼠肝指数明显增加（P<0.05）；右归丸组与模型组比较肝指数明显降低（P<0.05）。④肝组织形态学观察结果：与正常对照组比较，模型组大鼠肝小叶结构明显紊乱，肝细胞索模糊乃至消失，肝细胞形态不均一，细胞体积增大，胞质疏松，胞浆内充满大小不一脂滴，可见部分细胞核挤向胞膜，部分细胞核溶解，汇管区炎性细胞浸润较明显，另可见散在的点状坏死灶。右归丸组大鼠肝小叶结构较完整，肝细胞排列较整齐，体积明显缩小，脂滴较模型组少，肝细胞脂肪变性明显改善，少许炎性细胞浸润。⑤LXRα蛋白表达结果：实验大鼠免疫组化LXRα蛋白阳性反映，模型组大鼠肝组织LXRα蛋白表达最强、右归丸组有所减弱、正常组最弱。⑥JAK2、STAT3、LXRα、SREBP-1c、FAS的mRNA表达结果：与正常对照组比较，模型组大鼠肝组织JAK2、STAT3、LXRα、SREBP-1c、FAS的mRNA的表达水平显著升高（P＜0.01）；右归丸组JAK2、STAT3、LXRα、SREBP-1c、FASmRNA的表达水平明显升高（P＜0.05）；但右归丸组较模型组JAK2、STAT3、LXRα、SREBP-1c、FASmRNA的表达水平显著降低（P＜0.01）。对大鼠肝组织SREBP-1c和FAS蛋白表达结果显示：模型组的灰度值最大，胶片的条带最粗，蛋白表达最强，其次为右归丸组，再次为正常组，灰度值最小，胶片的条带最细，蛋白表达最弱。⑦ABCA1、CETP的mRNA的表达结果：与正常对照组比，模型组大鼠血浆中ABCA1和CETP的mRNA的表达水平显著升高（P＜0.01）；右归丸组ABCA1和CETPmRNA的表达水平明显升高（P＜0.05）；但右归丸组较模型组ABCA1和CETPmRNA的表达水平显著降低（P＜0.01）。大鼠血浆中ABCA1和CETP蛋白表达结果显示：模型组的灰度值最大，胶片的条带最粗，蛋白表达最强，其次为右归丸组，再次为正常组，灰度值最小，胶片的条带最细，蛋白表达最弱。结论：①采用肌注氢化可的松复制肾阳虚大鼠模型，模型大鼠的一般情况，及模型大鼠24小时尿17-OH-CS和血清T含量明显降低都符合肾阳虚证的诊断标准，同时血清TG、TC、LDL-C含量明显升高，HDL-C含量明显降低，表明肾阳虚高脂血症大鼠模型复制成功。②高脂血症可以导致肝组织脂类代谢障碍，并出现形态学改变。③温补肾阳方药——右归丸可以抑制机体JAK2、STAT3、LXRα、SREBP-1c和FAS的表达，减少甘油三酯的合成。④温补肾阳方药——右归丸可以通过下调JAK2、STAT3、LXRα、ABCA1和CETP的表达，减少胆固醇在血浆中的沉积，促进胆固醇入肝脏代谢。本研究首次采用肌注氢化可的松方法成功复制出肾阳虚高脂血症大鼠模型，率先提出肾阳虚是高脂血症的主要病机；实验研究发现，肾阳虚激活了模型大鼠肝组织中的JAK2/STAT3通路，使其LXRα蛋白过度表达，进而使其下游的SREBP-1c和FAS以及ABCA1和CETP蛋白表达增多，从而使机体血清中TG和TC含量显著增高，因而形成高脂血症；温补肾阳方药——右归丸可以显著降低LXRα蛋白的表达，从而改善模型大鼠的高血脂状态。由此推知，右归丸调节血脂代谢、纠正血脂紊乱的机制可能是通过抑制LXRα蛋白的过度表达而实现的。
【作者】徐安莉；
【导师】周安方；
【作者基本信息】湖北中医药大学，中医基础理论，2014，博士
【关键词】肾阳虚；高脂血症；JAK2/STAT3通路；LXRα蛋白；右归丸；作用机制；

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