硼替佐米对小鼠H22肝癌的抑制作用及其机制研究

【摘要】第一部分硼替佐米对小鼠H22肝癌的抑制作用及其机制研究目的：通过观察硼替佐米（Bortezomib）对小鼠肝癌肝癌细胞H22皮下移植瘤的生长抑制作用，初步探讨其作用机制。方法：皮下注射H22细胞建立小鼠肿瘤模型后，尾静脉注射Bortezomib隔三天给药一次，共给药四次，观察肿瘤生长情况，同时称重、测量皮下移植瘤大小，给药结束后一周，处死小鼠，解剖小鼠取皮下移植瘤做免疫组化，观察肿瘤细胞内凋亡相关蛋白表达。结果：实验组小鼠肿瘤体积与对照组相比存在显著性差异（P＜0.05）；实验组小鼠肿瘤体积/小鼠体重较对照组有统计学差异（P<0.05）；免疫组化示：给药组促凋亡蛋白TNF-α的表达明显高于生理盐水对照组，而凋亡抑制蛋白（XIAP、SURVIVIN、STAT3）的表达则明显降低（P＜0.05）。结论：蛋白酶体抑制剂Bortezomib可明显抑制H22皮下移植瘤的生长；给药组皮下移植瘤促凋亡蛋白表达较生理盐水对照组增加，抑凋亡蛋白表达减少，提示Bortezomib抑制H22肝癌肿瘤生长可能是通过诱导肿瘤细胞凋亡实现的,说明它有可能成为治疗肝癌的新的分子靶向药物。具体研究机制值得我们进一步深入研究。第二部分GFP及ISG15质粒转染人肝癌细胞株及表达研究目的：筛选出稳定表达GFP绿色荧光的肝癌细胞株及研究ISG15质粒的转染表达方法：用脂质体LipofectamineLTX将pcDNA3.1-GFP和PcDNA4.0-ISG15质粒分别转染肝癌细胞株MHCC97H，MHCC97L。用G418筛选稳定表达GFP绿色荧光的肝癌细胞株；WesternBlotting检测ISG15表达水平。结果：将PcDNA3.1-GFP质粒及PcDNA4.0-ISG15质粒转入肝癌细胞后，荧光显微镜拍照及WesternBlotting提示转染成功，G418筛选带荧光肝癌细胞株的最佳药物维持浓度为为400微克/毫升。最终发现ISG15转染前后表达差异显著（P<0.05),G418行GFP稳定表达肝癌细胞株筛选失败。结论：利用脂质体转染方法进行质粒转染方法可行，可用于质粒转染及表达，但进行肝癌细胞稳定转染效果不佳，考虑主要原因是所选肝癌细胞对脂质体转染试剂不敏感，或脂质体转染试剂本身转染效率有待提高或存在一定细胞毒性。目前有更高效低毒的慢病毒转染方法，今后再行稳定转染表达应考虑采用。
【作者】朱民高；
【导师】庄志祥；朱虹；
【作者基本信息】苏州大学，肿瘤学，2014，硕士
【关键词】Bortezomib（硼替佐米）；H22细胞；KM小鼠；尾静脉注射；免疫组化；凋亡；硼替佐米；昆明鼠；ISG15；GFP；

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