RGD修饰的IL-24和PTEN双基因腺病毒载体对非小细胞肺癌PC-9/GR细胞吉非替尼获得性耐药逆转及耐药机制的研究

【摘要】目的：研究腺病毒介导的IL-24和PTEN双基因共表达载体对人肺腺癌PC-9/GR细胞吉非替尼耐药性的逆转及耐药机制的探索。方法：构建Ad.RGD-IL-24、Ad.RGD-PTEN、Ad.RGD-IL-24-PTEN单双基因重组腺病毒，将上述病毒转染QBI-293A细胞，经多轮感染扩增、纯化后测定效价，-80℃保存备用。分组处理细胞后用MTT法检测各组PC-9/GR细胞生长情况及对吉非替尼的IC50的变化；流式细胞仪检测细胞生长周期分布；Westernblot检测治疗后PC-9/GR细胞相关蛋白表达量的变化；检测PC-9、PC-9/GR细胞株中P-gp、LRP、IGF-1R的表达，以探索PC-9/GR细胞株吉非替尼耐药的机制；培养PC-9/GR细胞株，建立PC-9/GR肺腺癌裸鼠移植瘤模型，随机分组治疗后摘取瘤体，计算体积、重量，免疫组化法检测各凋亡相关蛋白及肿瘤血管生成相关因子的表达。结果：1.成功构建了含RGD的载有IL-24和PTEN的单双基因重组腺病毒载体；2.PC-9/GR细胞在经过单、双基因感染，再予以吉非替尼治疗后，对细胞的生长抑制率较单纯吉非替尼治疗有显著升高，其中，以双基因联合吉非替尼对细胞的生长抑制率最高；3.经过含有PTEN、IL-24单双基因重组腺病毒感染PC-9/GR细胞后出现半数致死所需吉非替尼的浓度明显下降，Ad.RGD-IL-24-PTEN双基因组表达对吉非替尼耐药的逆转尤为明显；4.经双基因组联合吉非替尼处理PC-9/GR细胞后，细胞在G2/M期出现明显阻滞，可达（55.13±3.79）%，十分接近吉非替尼敏感的PC-9细胞。5.Western-Bolt显示，IL-24，PTEN单、双基因均能上调促凋亡相关蛋白表达，以双基因联合吉非替尼组调节作用最为显著。6.IGF-1R在PC-9/GR细胞中表达较PC-9细胞高。7.裸鼠模型的抗肿瘤实验证实：双基因联合吉非替尼组抑瘤效果明显优于单基因组及单基因联合吉非替尼组，并且，其上调促凋亡因子、下调抑制凋亡相关蛋白及肿瘤血管生成因子的作用也显著强于其它各组。结论：1、RGD修饰的腺病毒介导的IL-24-PTEN双基因共表达载体可以高效地介导外源双基因的表达。2、腺病毒介导的IL-24-PTEN双基因共表达载体对耐吉非替尼的人肺腺癌PC-9/GR细胞具有明显的耐药逆转作用及其裸鼠移植瘤生长抑制作用，其分子机制可能与IGF-1R有关。3、腺病毒介导的IL-24-PTEN双基因共表达载体对耐吉非替尼的人肺腺癌PC-9/GR细胞及裸鼠移植瘤的生长抑制优于其中任一单个基因的作用。
【作者】汪泱；
【导师】朱晔涵；
【作者基本信息】苏州大学，内科学，2014，硕士
【关键词】非小细胞肺癌；吉非替尼耐药；IL-24；PTEN；IGF-1R；

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