广东部分地区犬流感血清流行病学调查及病毒的分离鉴定

广东部分地区犬流感血清流行病学调查及病毒的分离鉴定

作者:师大云端图书馆 时间:2017-08-20 分类:硕士论文 喜欢:2583
师大云端图书馆

【摘要】犬流感是由犬流感病毒(Canineinfluenzavirus,CIV)引起的一种高度接触性、传染性呼吸道疾病。已经证实有马源H3N8和禽源H3N2亚型流感病毒可以造成犬的感染,并引起犬的种内传播。犬与人类接触密切,目前尚不清楚流感病毒是否可以通过犬传染给人。因此,对犬流感的流行病学调查和病毒的监测具有重要公共卫生意义。研究利用血凝抑制试验对来源于广东省的309份犬血清样本进行H3亚型流感病毒抗体检测,总体阳性率为26.21%。对不同类型、不同区域的犬抗体阳性率进行比较,结果显示宠物犬、农家犬及流浪犬的抗体阳性率分别为34.02%、9.09%和25.93%,个别地区的阳性率超过50%。说明H3亚型犬流感已在犬群中流行,并且与近年的调查结果相比呈上升趋势。采集广东地区29份有呼吸道症状犬的鼻拭子,接种鸡胚分离病毒,并进行亚型鉴定和序列分析。分离获得2株H3N2亚型犬流感病毒,分别命名为A/canine/Guangdong/12/2012(H3N2)及A/canine/Guangdong/23/2012(H3N2).根据参考毒株的基因序列设计特异性引物,用RT-PCR的方法分别扩增两株病毒的8个基因片段,克隆入pMD-19T载体进行基因测序,并构建基因进化树。结果显示分离病毒的8个片段与韩国禽源犬、猫流感毒株、泰国分离株以及广东、江苏、北京、浙江、辽宁分离株的基因同源性均较高,达到98%-99%,与泰国2012年分离株在演化关系上最为接近。氨基酸比对显示HA的裂解位点、抗原位点、受体结合位点及潜在糖基化位点与禽源株相比均有突变。NA抗原位点也有突变,并在颈部有氨基酸插入。其中分离株A/canine/Guangdong/12/2012(H3N2)较独特,颈部只有一个氨基酸插入,与以往犬流感病毒中国分离株不同。为了建立针对多种亚型犬流感病毒的检测方法,选取犬流感病毒中保守的核蛋白(NP)基因,克隆至pET-32a载体,在大肠杆菌中诱导表达,然后进行SDS-PAGE和Western-blot分析。结果显示,NP蛋白获得成功表达,重组NP蛋白分子量为66ku,且与CIV全病毒抗血清可发生特异性反应,表明该蛋白具有良好的反应原性。重组NP蛋白的表达,为建立犬流感抗体ELISA检测方法提供了物质基础。上述研究为进一步探讨犬流感病毒的生物学特征和传播机制奠定基础,并为有效检测、科学防控犬流感提供参考依据。
【作者】郭昊;
【导师】刘永杰;罗卫强;
【作者基本信息】南京农业大学,预防兽医学,2013,硕士
【关键词】犬流感病毒;分离鉴定;流行病学;NP蛋白;H3N2;

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