新候选肿瘤抑制基因SLC8A2对胶质瘤细胞株U87的功能影响及相关机制研究

【摘要】第一部分SLC8A2对胶质瘤细胞株U87作用的体内外实验目的：构建过表达基因SLC8A2的U87稳定细胞株，通过体内外实验观察SLC8A2对胶质瘤细胞株U87的功能影响。方法：构建携带有SLC8A2全基因的慢病毒载体Lenti-SLC8A2-IRES-EGFP和阴性对照空病毒载体Lenti-EGFP，转染胶质瘤细胞株U87，筛选获得稳定表达靶基因及报告基因EGFP的胶质瘤细胞U87-SLC8A2（实验组）和仅稳定表达EGFP的胶质瘤细胞U87-NC（阴性对照组），并分别应用荧光定量PCR和Westernblot检测SLC8A2在各组细胞中的表达；应用Transwell小室及预铺Matrigel基质胶的Transwell小室检测SLC8A2对U87细胞侵袭迁移能力的影响；应用流式细胞仪技术检测SLC8A2对U87细胞周期的影响；运用CCK-8方法检测SLC8A2对U87细胞增殖的影响；通过裸鼠皮下移植瘤实验检测SLC8A2对U87细胞致瘤性的影响。结果：成功构建过表达SLC8A2的细胞株U87-SLC8A2；SLC8A2显著抑制了U87细胞的侵袭和迁移能力，但对U87细胞的增殖及周期无显著影响；裸鼠皮下移植瘤实验显示，接种U87-SLC8A2细胞的裸鼠全都不致瘤，而接种空白组与阴性对照组细胞的裸鼠全部致瘤成功。结论：SLC8A2能显著抑制胶质瘤细胞株U87的侵袭迁移能力和裸鼠致瘤性，表明SLC8A2有可能为胶质瘤相关抑癌基因。第二部分SLC8A2抑制胶质瘤细胞株U87侵袭迁移能力的机制研究目的：进一步探索SLC8A2抑制胶质瘤细胞株U87侵袭迁移能力的相关分子机制。方法：应用RT-PCR检测各组细胞中MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-9、MT1-MMP、uPA及uPAR转录水平的差异，并应用Westernblot检测各组细胞中MMP-2蛋白表达水平的差异；运用基质金属蛋白酶明胶酶谱法检测各组细胞分泌至培养基中MMP-2酶活性的变化；应用Westernblot检测各组细胞中NF-κB、MAPK及Akt通路中相关蛋白表达水平的差异。结果：与阴性对照组细胞相比，U87-SLC8A2组细胞中MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-9、MT1-MMP、uPA及uPAR的转录水平及MMP-2蛋白水平被显著下调（P＜0.01），且U87-SLC8A2细胞分泌至培养基中的MMP-2酶活性被显著抑制（P＜0.01）；与阴性对照组细胞相比，U87-SLC8A2组细胞中MMPs和uPA/uPAR系统的上游调控通路NF-κB及ERK1/2活性被显著抑制（P＜0.01）。结论：SLC8A2可能是通过ERK1/2-NF-κB-MMPs/uPA/uPAR信号轴抑制了胶质瘤细胞株U87的侵袭迁移能力。
【作者】余聚；
【导师】兰青；
【作者基本信息】苏州大学，神经外科学，2014，硕士
【关键词】SLC8A2；胶质瘤；侵袭；迁移；致瘤性；基质金属蛋白酶；尿激酶型纤溶酶原系统；核因子κB；ERK1/2信号通路；

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