人脂肪间充质干细胞与京尼平交联的Ⅰ型胶原蛋白支架构建组织工程脂肪的实验研究

【摘要】目的：探讨人脂肪间充质干细胞与京尼平交联的I型胶原蛋白支架材料构建组织工程脂肪的可行性。方法：1.分离培养人脂肪间充质干细胞(hADSCs),传代培养至第3代,接种于京尼平交联的I型胶原蛋白支架材料,测定细胞粘附率；MTT法评估hADSCs在支架材料上的粘附和增殖情况,支架材料对细胞的毒性作用；光镜和电镜分别观察hADSCs在支架材料上的粘附和生长,以及细胞形态学变化,评估]DSCs与京尼平交联的I型胶原蛋白材料的生物相容性。2.体外复合培养成脂和成血管内皮细胞诱导的hADSCs.实验分为3组,A组为实验组：：ADSCs和诱导的血管内皮细胞按4：1比例接种于支架材料；B、C组为对照组,B组：单纯接种1ADSCs:C组：单纯接种诱导的血管内皮细胞。细胞接种于支架材料并成脂诱导5-7天后,对细胞—支架复合物行油红O染色,RT-PCR检测成脂特异性基因PPARγ-2的表达,扫描电镜观察支架材料上细胞的生长及成脂情况。3.体内实验：将上述A.B.C3组细胞-支架复合物及空白支架材料(D组)分别植入雌性Wistar大鼠大鼠背部皮下。12周后,取材并观察移植物,移植物行组织形态学和扫描电镜观察,]RT-PCR检测成脂特异性基因PPARγ-2的表达。结果：1.hADSCs接种于支架材料后,能够迅速在材料上粘附、增殖,其平均黏附率为86.5%；光镜和扫描电镜显示hADSCs在支架材料上粘附性良好,随着时间的推移,细胞逐渐增多,可以迁移进入支架内部并均匀分布。2.体外实验：3组细胞在材料上均生长良好。RT-PCR检测到A、B两组成脂特异性基因PPARγ-2的表达；油红O染色表明成脂诱导后,A、B两组均成功诱导生成大量成熟脂肪细胞,C组则没有脂肪细胞生成。A、B两组和C组支架材料上的脂肪细胞数量有显著差异(P<0.01)。3.体内实验：A、B两组移植物油红O染色均呈阳性,HE染色显示A组成熟脂肪细胞和新生血管数量均明显多于B组,有显著差异(P<0.01),C组、D组移植物内未见成熟脂肪细胞和新生血管形成；各组材料较植入时均明显降解,且A组材料较其它各组降解更为明显。结论：1、hADSCs在京尼平交联的Ⅰ型胶原蛋白支架材料上能很好地粘附、增殖,材料对hADSCs的毒性较低,交联后的支架材料与1ADSCs具有良好的体外生物相容性。2、hADSCs成血管内皮细胞诱导分化后,和hADSCs复合接种于支架材料,在体外能成功地构建组织工程化脂肪。3、复合移植在体内更能显著促进构建组织工程化脂肪,并能促进构建物内的血管新生。
【作者】王刚；
【导师】刘毅；
【作者基本信息】兰州大学，外科学，2014，硕士
【关键词】脂肪组织工程；京尼平；Ⅰ型胶原蛋白；人脂肪间充质干细胞；共培养；工程脂肪；血管新生；

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