抗猪瘟病毒疫苗效力免疫监测方法的建立及应用

【摘要】猪瘟是一类有传染性的猪类疾病，经常给养猪业造成巨大的经济损失。用猪瘟疫苗免疫猪是控制猪瘟的常用手段。不同厂家，不同批次的猪瘟疫苗常产生不同的免疫效果，而E2蛋白是诱导机体产生中和性抗体的主要抗原表位，也是多种疫苗研究的主要目标蛋白，为了解猪瘟疫苗免疫后猪瘟抗体的产生情况以及猪场生产实践中对不同猪瘟疫苗进行评价，需要建立一种猪瘟疫苗免疫效力的监测方法。本研究通过PCR扩增了石门株猪瘟病毒基因组上开放性阅读框内的2455bp～3016bp之间的片段并克隆到原核表达载体PET-32a中，构建原核表达质粒PET32a-mE2。将原核表达质粒转化入大肠杆菌BL21中，经过SDS-PAGE电泳分析表明mE2蛋白主要以包涵体形式存在于大肠杆菌中，在37℃条件下用0.1mMIPTG诱导表达3h。mE2蛋白用8M尿素变性处理后用Ni-NTA柱纯化，纯化后用6M尿素，4M尿素，2M尿素，1M尿素,0.5M尿素，PBS进行梯度透析，复性mE2蛋白。用BCA法测蛋白浓度为152ug/ml。将纯化的蛋白作为包被抗原包被ELISA板，建立检测猪瘟抗体的间接ELISA法，并摸索最佳反应条件。OPD室温避光显色15min，2M硫酸终止反应。用酶标仪测定OD450值。当待检血清OD450值大于0.222确定为阳性血清，对建立的间接ELISA法进行批内重复性实验，结果显示重复性良好。分别测定PRV，PCV2阳性血清，进行特异性检验，结果表明此种方法特异性良好。利用此方法对92份血清进行样本测定，与IDEXX猪瘟抗体检测试剂盒测定结果比对，符合率为84%。应用此方法分别对一个厂家的脾淋源猪瘟活疫苗与三个厂家的细胞源猪瘟活疫苗免疫过的120头仔猪的免疫效果进行评价。发现脾淋源猪瘟活疫苗的免疫效果要优于细胞源猪瘟活疫苗，三个厂家的细胞源猪瘟活疫苗产生的抗体阳性率基本一致，但是产生的抗体效价不同。证明建立的间接ELISA法可以应用于猪瘟疫苗的免疫效力监测，为猪瘟抗体检测试剂盒的开发奠定了基础。
【作者】苏佰通；
【导师】欧阳红生；
【作者基本信息】吉林大学，生物工程，2014，硕士
【关键词】猪瘟病毒；E2蛋白；间接ELISA；猪瘟疫苗；免疫监测；

【参考文献】
[1]王嵩.基于DSP的APSO算法在光伏最大功率点追踪中的应用[D].北京工商大学,控制工程与控制理论,2013,硕士.
[2]张塬.少数民族地区社会主义新农村建设现状及对策研究[D].西南大学,科学社会主义与国际共产主义运动,2013,硕士.
[3]陈丽明.类风湿关节炎合并间质性肺疾病临床分析[D].吉林大学,临床医学（专业学位）,2013,硕士.
[4]栗娜.NF-κB、MCP-1在糖尿病大鼠肾组织的表达及丹红注射液和二甲双胍的干预作用[D].河北医科大学,内科学,2014,硕士.
[5]邵银波,李强.应用型数据挖掘系统及其信息共享和协作[J].空军雷达学院学报,2002,01:42-44.
[6]张迪.广义强向量均衡问题的辅助问题算法[D].渤海大学,运筹学与控制论,2014,硕士.
[7]刘兵.泰山历史文化轴线山地段人文景观及空间研究[D].山东农业大学,森林培育,2014,博士.
[8]曲仙智.早期全身应用低分子肝素预防脾切除门奇断流术后门静脉血栓形成[D].吉林大学,临床医学,2013,硕士.
[9]程清.《功夫熊猫2》中熊猫形象的重塑与融合[D].湖北工业大学,外国语言学及应用语言学,2014,硕士.
[10]孙秀玲,雷圣宾.寡聚噻吩在CVD石墨烯表面自组装的调控:官能团、溶剂、基底效应[A].中国化学会.中国化学会第29届学术年会摘要集——第01分会：表面物理化学[C].中国化学会:,2014:1.
[11]胡翠.探讨骨桥蛋白在寻常型银屑病发病中的作用及临床意义[D].华中科技大学,皮肤性病学,2013,硕士.
[12]高创.利用环氧单体修饰芳香性导电高分子[D].济南大学,物理化学,2012,硕士.
[13]朱平.后殖民语境下的人的异化、自由与责任[D].中国人民解放军外国语学院,英语语言文学,2004,硕士.
[14]杨光.情绪刺激和语义刺激的内隐序列学习研究[D].沈阳师范大学,应用心理学,2014,硕士.
[15]赵建梅.英国威尔士双语教育对新疆双语教育的启示[J].新疆社会科学,2014,06:146-151+162.
[16]陈晓珂.吉西他滨诱导人NK/T细胞淋巴瘤细胞株SNK-6凋亡观察[D].郑州大学,肿瘤学（专业学位）,2013,硕士.
[17]赵瑞笑.上市公司股权再融资对公司绩效影响的实证研究[D].山西财经大学,会计学,2014,硕士.
[18]成奕霖.商业银行董事会结构与绩效间动态内生性关系研究[D].成都理工大学,企业管理,2013,硕士.
[19]朱明威.少数民族散杂居区的农村综合式扶贫模式研究[D].广东技术师范学院,民族学,2013,硕士.
[20]付革红,李淑丽,代红红.自组织模糊控制器在S5－115U上的开发[J].冶金自动化,1996,04:34-36.
[21]苗苗,姜建国.一种采用类电磁机制算法的线性分类方法[J].西安电子科技大学学报,2015,02:95-101.
[22]罗锋.金属滑移隔震支座结构的减震性能分析[D].山东大学,结构工程,2013,硕士.
[23]赵晓莉.考虑静态约束的暂态稳定极限计算[D].浙江大学,电力系统及其自动化,2004,硕士.
[24]吴莹.辽宁农村文化建设中乡镇政府创新作为研究[D].大连海事大学,马克思主义理论,2013,硕士.
[25]吴树宽.西秦岭北缘晚古生代构造格局及其演化过程[D].长安大学,构造地质学,2013,硕士.
[26]罗艳.针对汉语初等水平泰国中学生的汉语语音教学设计[D].河北师范大学,汉语国际教育,2013,硕士.
[27]黄胜潮.国际粮食价格波动及其对我国粮食供需平衡的影响研究[D].河北师范大学,世界经济,2013,硕士.
[28]张文.MSCs诱导分化为心肌细胞分子调控机制的初步实验研究[D].重庆医科大学,儿科学,2004,硕士.
[29]张人羡.刚构—连续组合体系梁桥的工程控制及参数敏感性分析[D].长沙理工大学,桥梁与隧道工程,2012,硕士.
[30]杨启成.卷烟成品柔性搬运系统高可靠性的研究及实现[D].重庆大学,机械工程,2003,硕士.
[31]张丽娜.我国全要素生产率的估计问题研究方法及影响因素分析[D].厦门大学,产业经济学,2014,硕士.
[32]熊龙雨.移动互联网环境下大学生思想政治教育研究[D].华中科技大学,马克思主义基本原理,2012,硕士.
[33]黄小永.陇山以西考古资料反映的秦早期文化特质[D].西北师范大学,文物与博物馆学（专业学位）,2013,硕士.
[34]刘桂英.中生菌素对水稻悬浮细胞主要防御酶的系统诱导[D].中国农业科学院,微生物学,2004,硕士.
[35]金亦挺.基于双目视觉的角点检测与匹配研究及其在涂胶机器人中的应用[D].浙江工业大学,计算机应用技术,2012,硕士.
[36]赵宁.食管鳞癌中血管内皮生长因子对树突状细胞的影响[D].山西医科大学,病理学,2002,硕士.
[37]曾友志.基于修正三叉树模型的我国上市可转债定价实证研究[D].北京物资学院,产业经济学,2013,硕士.
[38]许志明.配药机器人的设计与实现[D].哈尔滨工业大学,机械工程,2013,硕士.
[39]陈功.家禽养殖户购买农业保险因素研究[D].中南林业科技大学,农村与区域发展,2014,硕士.
[40]陈尚文.论金属矿产资源的合理开发利用[J].长沙矿山研究院季刊.1982(04)
[41]杨海东.饮用水高级氧化处理技术的生物有效性研究[D].大连海事大学,船舶与海洋工程,2014,硕士.
[42]陈宛希.建国以来的《长生殿》研究：回顾与反思[D].中国艺术研究院,戏剧戏曲学,2013,硕士.
[43]邵诗玥.低碳生活理念下的城市公园绿地研究[D].西安建筑科技大学,风景园林（专业学位）,2013,硕士.
[44]白三省.内吗啡肽-1血管扩张作用机制的初步实验研究[D].第四军医大学,外科学,2013,硕士.
[45]陈青梅.烟草商业企业顾客满意度综合评价研究[D].贵州财经大学,企业管理,2013,硕士.
[46]张述.城市轨道交通对房地产价格的空间效应研究[D].浙江大学,2014.
[47]史龙波.应力腐蚀裂纹尖端力学特征分析[D].西安科技大学,机械设计及理论,2013,硕士.
[48]常建宇.基于Web的文华学院学生就业管理系统的设计与实现[D].电子科技大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[49]韩瑜.铁路建设项目环保投资体系界定[D].西南交通大学,环境工程,2014,硕士.
[50]蒋发森.映秀地区岩浆岩边坡地震动力响应规律研究[D].成都理工大学,地质工程,2013,硕士.