草乌中生物碱类化学成分的研究

【摘要】草乌（AconitikusnezoffiiRadix）为毛茛科植物北乌头(AconitumkusnezoffiiReichb.)的干燥块根，民间药用历史悠久，常被用于治疗风湿、麻痹、寒疝、疼痛等症状。草乌的主要生物活性成分为二萜类生物碱，其中普遍存在且含量较高的是乌头碱、次乌头碱和新乌头碱。它们既是药材中主要的药效成分，同时又是毒性很强的成分，用药不当易造成中毒现象，这就使草乌的广泛应用受到了限制，因此，为保证服用安全，必须严格控制药材中此类生物碱成分的含量。本文对草乌中的生物碱类成分进行了研究。首先从草乌的乙酸乙酯提取物中分离得到八个生物碱类化合物，除常见三种乌头碱型生物碱外，对其余五个化合物采用核磁、质谱等波谱学手段鉴定了化学结构，它们分别为准噶尔乌头碱、准噶尔乌头胺、塔拉乌头胺、多根乌头碱、3-脱氧乌头碱。其中准噶尔乌头碱、准噶尔乌头胺、多根乌头碱均为首次从草乌中分离得到。本文还建立了草乌中准噶尔乌头碱的HPLC-ELSD含量测定方法。一、生物碱类化学成分的提取、分离和结构鉴定1.1提取取干燥的草乌10kg，粉碎，以乙酸乙酯-氨水溶液（20:1）为流动相渗漉提取，将提取液浓缩，用0.5%的HCl酸化至pH=1～2，乙酸乙酯萃取4次，将水层合并、浓缩，再用0.5%的NaOH碱化至pH=11～12,乙酸乙酯萃取4次，取乙酸乙酯层合并、浓缩，得粗提取物310g。1.2分离及纯化将粗提取物（310g）进行硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯-二乙胺为流动相梯度洗脱，得到五个部分。将第一部分（40g）以石油醚-丙酮-二乙胺为流动相进行硅胶柱层析，得到A（10g）、B（5g）两个部分。A部分进行硅胶柱层析，得到化合物cw-1（2.0g）和化合物cw-6（860mg）。B部分经过硅胶柱层析和重结晶，得到化合物cw-3（1.0g）。将第二部分（35g）以石油醚-丙酮-二乙胺为流动相进行硅胶柱层析，得到C（9.4g）、D（3.0g）两个部分。C部分进行硅胶柱层析，得到化合物cw-7（560mg）和C-1（5.2g）部分；再将C-1部分进行硅胶柱层析，并经重结晶得到化合物cw-5（200mg）。将D部分进行硅胶柱层析，并经重结晶得到化合物cw-2（550mg）。将第四部分（42g）以石油醚-丙酮-二乙胺为流动相进行硅胶柱层析，得到E（17g）部分。再将E部分进行硅胶柱层析，得到化合物cw-8（4.0g）和E-1（5.0g）部分；E-1部分经硅胶柱层析和重结晶得到化合物cw-4（70mg）。1.3结构鉴定通过薄层色谱（TLC）与标准品对照，鉴定化合物cw-6、cw-7、cw-8分别是乌头碱、次乌头碱和新乌头碱；利用核磁、质谱、红外等波谱分析手段，经与文献对照鉴定了另外5个化合物的结构，它们分别是准噶尔乌头碱（cw-1）、准噶尔乌头胺（cw-2）、塔拉乌头胺（cw-3）、多根乌头碱（cw-4）、3-脱氧乌头碱（cw-5）。其中准噶尔乌头碱、准噶尔乌头胺、多根乌头碱均为首次从草乌中分离得到。二、HPLC-ELSD法测定草乌中准噶尔乌头碱（cw-1）的含量2.1仪器和色谱条件所用的高效液相色谱仪为Agilent1200HPLC，检测器为Alltech2000ELSD；色谱柱为AgilentExtend-C18(4.6×250mm,5μm)；流动相为乙腈-0.1%三乙胺溶液（40:60），柱温为25℃，流速为1.0mL·min-1，进样量为20μL。ELSD检测器的漂移管温度设为96℃，气体（空气）压力为2.50bar，撞击器呈关闭状态。2.2方法学考察2.2.1线性关系在进样量1.5μg～30μg范围内化合物cw-1的lgS均（S均为平均峰面积）和lgm（m为进样质量）具有良好的线性关系，线性方程为：lgS均=1.6311lgm+0.1061，R2=0.9991。2.2.2精密度实验化合物cw-1日内和日间峰面积的RSD值分别为0.26%和1.54%，均小于2%，说明精密度良好。2.2.3重复性试验6份供试品溶液的测定结果显示，化合物cw-1含量的RSD值为1.41%，小于2%，说明重复性良好。2.2.4稳定性试验将供试品溶液在0～10h内，每隔2h测定一次。结果显示，化合物cw-1峰面积的RSD值为1.68%，小于2%，说明供试品溶液在0～10h内稳定性良好。2.2.5加样回收率化合物cw-1的平均加样回收率为96.86%，RSD值为1.67%，说明回收率良好。2.3含量测定河北安国产草乌中准噶尔乌头碱的平均含量为0.9238mg·g-1，吉林磐石产草乌中准噶尔乌头碱的平均含量为1.319mg·g-1，云南大理产草乌中准噶尔乌头碱的平均含量为1.768mg·g-1，安徽亳州产草乌中准噶尔乌头碱的平均含量为1.635mg·g-1。结果表明，不同产地的草乌药材中准噶尔乌头碱的含量略有差别,但大多数在0.1%以上,属于含量较高的生物碱类成分。因此，有必要将准噶尔乌头碱的含量测定指标纳入草乌药材质量标准之中。三、总结本文在国内外学者研究的基础上，对草乌中的生物碱类化学成分进行了深入研究，共分离并鉴定了8个单体化合物，其中3个为首次从草乌中分得，本文还建立了草乌中准噶尔乌头碱的HPLC-ELSD含量测定方法。本文的研究结果为草乌药材质量标准的完善以及药材安全、合理的应用提供了科学依据。
【作者】彭劭；
【导师】李绪文；金永日；
【作者基本信息】吉林大学，分析化学，2014，硕士
【关键词】草乌；生物碱；HPLC-ELSD；含量测定；

【参考文献】
[1]石岩.专家与熟手教师古诗词教学的比较研究[D].山东师范大学,教育（专业学位）,2013,硕士.
[2]汪超.石墨烯复合材料研究进展[J].广州化工,2013,08:40-41+118.
[3]林鸿姣.社会保障非政府组织的解析与重构[D].华东政法学院,法律,2004,硕士.
[4]张淑梅.国际税收协作法律问题研究[D].天津财经大学,经济法学,2012,硕士.
[5]杜珍妮.SnS_2和SnS_2/SnO_2纳米粉的合成与光催化性质[D].扬州大学,无机化学,2011,硕士.
[6]赵岚.壳聚糖及其衍生物微球与微胶囊[D].天津大学,材料学,2004,硕士.
[7]赵瑾.东周时期出土玉璧用途的初步研究[D].中国艺术研究院,美术学,2013,硕士.
[8]肖剑.脂联素和BNP在糖尿病肾病不同时期的表达及药物干预的研究[D].泰山医学院,内科学,2012,硕士.
[9]段宾宾.信阳毛尖致香物质的提取分离与加香效应研究[D].河南农业大学,烟草学,2012,硕士.
[10]胡湛.论政府信息公开制度中的个人隐私[D].中国政法大学,比较法学,2014,硕士.
[11]吴丹,付悦.中国乐曲节奏的无标度分析[J].电子科技大学学报,2014,04:482-485.
[12]张琦.股票筹资风险管理及相关问题研究[D].东北财经大学,会计学,2003,硕士.
[13]赵恒远,张宏新.高速线材轧机活套控制系统[J].冶金自动化,1992,03:32-34+59.
[14]谢永清.基于NGB-W系统的LDPC码译码器的设计与仿真实现[D].南昌航空大学,检测技术与自动化装置,2013,硕士.
[15]张吉磊.3-羟基吲哚酮类化合物与二芳基醚衍生物的合成研究[D].温州大学,有机化学,2012,硕士.
[16]马宁.Ce/Gd/Nd微合金化对镁合金组织与性能的影响[D].燕山大学,材料学,2013,硕士.
[17]胡晓威.中央带缺口立方体试件的双K断裂韧度及其率相关性分析[D].大连理工大学,结构工程,2013,硕士.
[18]宗丽芳.微电网后台监控系统的设计[D].曲阜师范大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[19]许展宁.利率市场化条件下我国城市商业银行的对策研究[D].山东财经大学,金融（专业学位）,2013,硕士.
[20]张定高.论罗蒂协同性实用主义真理观[D].南京师范大学,科学技术哲学,2012,硕士.
[21]高芳峭.SH-SY5Y细胞内pH值降低对早老素-1表达的影响[D].辽宁医学院,神经病学,2012,硕士.
[22]高魁明.连续退火炉内移动钢板温度的测量(译述)[J].冶金自动化,1980,01:45-47.
[23]钱毋荒,张汉三.158工程及281机质量管理[J].电讯技术.1986(04)
[24]王文刚.加入WTO对黑龙江省玉米、大豆、水稻生产与贸易的影响与对策[D].东北农业大学,农业推广,2003,硕士.
[25]杨艳霞.对外汉语初级阶段汉字字形课的教学研究[D].西北师范大学,汉语国际教育（专业学位）,2013,硕士.
[26]陈思敏.基于产业关联的江苏海陆产业统筹发展研究[D].中共江苏省委党校,政治经济学,2013,硕士.
[27]马姗.我国引导扶持低碳生活消费方式的政策研究[D].郑州大学,科学技术哲学,2013,硕士.
[28]于宗平.体态语与对外汉语初级阶段词语教学[D].渤海大学,汉语国际教育（专业学位）,2014,硕士.
[29]艾娟.目的原则下的法庭问答互动中话语标记语的研究[D].湖北工业大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[30]李晋琦.基于使用行为的地铁站地下换乘空间评价方法研究[D].天津大学,建筑设计及其理论,2013,硕士.
[31]杨常顺.K-ras、BRAF基因在结直肠癌中突变特征及其临床意义[D].福建医科大学,外科学,2014,硕士.
[32]李昕.中西艺术歌曲钢琴伴奏写作分析[D].云南艺术学院,音乐学,2013,硕士.
[33]刘树海.昆明铁路局建立完善工效挂钩运行机制的探讨[D].西南交通大学,交通运输工程,2013,硕士.
[34]王芳芳,李景叶,陈小宏.基于马尔科夫链先验模型的贝叶斯岩相识别[J].石油地球物理勘探,2014,01:183-189+306.
[35]吴爱侠.干式盘管加独立新风空调系统性能及自然冷源利用研究[D].天津商业大学,供热、供燃气、通风及空调工程,2013,硕士.
[36]吴丽萍.单振子双腔体压电泵的理论与实验研究[D].吉林大学,机械设计及理论,2004,硕士.
[37]郭仪昊.关于几类特殊图的群连通度的研究[D].中国矿业大学,计算数学,2014,硕士.
[38]朱春泗.真空冷冻干燥食品HACCP质量控制体系的研究[J].山东食品科技.2002(12)
[39]康子博,柴天佑,尹英杰,藤井省三.SCARA型机械手的鲁棒防振控制[J].控制与决策,1997,05:554-558+564.
[40]杜连欢,张龙,麦文杰.ZnO-GO-Pd复合材料的光催化性能及其增强机理[A].中国化学会.中国化学会第29届学术年会摘要集——第12分会：催化化学[C].中国化学会:,2014:1.
[41]霍雁平.哈维·威利与美国食品药品联邦监管的缘起[D].内蒙古师范大学,专门史,2013,硕士.
[42]刘迪.商业银行并购贷款监管法律问题研究[D].四川省社会科学院,法律（专业学位）,2014,硕士.
[43]祁培.先秦齐地盐业的形成与演变[D].华中师范大学,区域文化史,2014,硕士.
[44]翁春发.原发性高血压患者血浆ALD与KCNJ5基因多态性的相关性分析[D].福建医科大学,内科学,2014,硕士.
[45]杨晓利.替吉奥或卡培他滨联合奥沙利铂一线治疗晚期结直肠癌效果对比分析[D].郑州大学,肿瘤学（专业学位）,2013,硕士.
[46]陈伟.和谐社会背景下人民调解制度的完善研究[D].齐鲁工业大学,马克思主义中国化研究,2014,硕士.
[47]袁宝泉.煤灰熔融特性的影响因素及其调控的实验研究[D].中国矿业大学,矿业工程,2014,硕士.
[48]陈林.基于NFC技术的近场支付安全性研究[D].西北大学,信号与信息处理,2013,硕士.
[49]朱辉杰.制造业信息化需求步入深水区存储业呼唤“活性”存储方案[J].CAD/CAM与制造业信息化,2005,11:82-83.
[50]刘振武.热烈庆贺《石油地球物理勘探》创刊50年[J].石油地球物理勘探,2015,02:203.