Ad.RGD-ING4对人鼻咽癌细胞及其裸鼠移植瘤放疗增敏效应的实验研究

【摘要】目的:1.RGD修饰的腺病毒介导的ING4（Ad.RGD－ING4）对人鼻咽癌细胞CNE体外、体内放射增敏效应。2.初步探讨RGD修饰的腺病毒介导的ING4（Ad.RGD-ING4）对人鼻咽癌细胞放射增敏的作用机制。方法：体外：用QBI-293A细胞扩增Ad.RGD－ING4并测定效价；检测Ad.RGD－ING4在CNE人鼻咽癌细胞中感染效率，确定最佳感染复数；按重组腺病毒的最佳感染复数将Ad.RGD-ING4体外感染CNE人鼻咽癌细胞，使用RT-PCR及Westernblot方法检测ING4基因在CNE中的转录及表达；不同放射剂量照射CNE细胞，用Annexin-V-PE/7-AAD双染色的FCM检测细胞凋亡率以寻找合适的实验放射剂量；MTT法检测Ad.RGD－ING4联合放疗对CNE细胞的生长抑制作用；流式细胞术(FCM)检测Ad.RGD－ING4联合放疗对CNE细胞的周期生长的影响和促凋亡效应；运用RT-PCR检测Ad.RGD-ING4联合放疗对CNE细胞中Bax、Bcl-2、P21mRNA的表达水平的影响并运用Westernblot检测以分析Survivin、Caspase3凋亡相关蛋白表达的变化。体内：建立CNE人鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤模型，用Ad.RGD－ING4联合放疗进行实验干预，检测瘤体体积及重量，运用免疫组化方法检测CNE人鼻咽癌细胞移植瘤中P21、Bax、Bcl-2、VEGF、CD34、Survivin的表达情况。结果：1.RT-PCR和Westernblot检测均显示RGD修饰的重组腺病毒介导的ING4基因能在CNE人鼻咽癌细胞中稳定转录和翻译。2.Ad.RGD－ING4联合放疗在体外能显著抑制CNE细胞的生长、导致细胞G2/M期阻滞和诱导细胞凋亡，并且其结果优于Ad.RGD－ING4组、单纯放疗组（P<0.05）。3.体内实验表明Ad.RGD－ING4联合放疗可以显著抑制裸鼠人鼻咽癌移植瘤的生长，其结果优于Ad.RGD－ING4组、单纯放疗组（P<0.05），并具有抑瘤增效的相加作用（Q=1.04）。4.细胞分子机制检测发现：Ad.RGD－ING4联合放疗能明显上调CNE人鼻咽癌细胞P21、Bax、cleavedCaspase-3和下调Bcl-2、Survivin、CD34、VEGF等细胞周期和凋亡相关因子以及肿瘤相关血管生成因子的表达，且其效应均较Ad.RGD－ING4组、单纯放疗组更为显著。结论：Ad.RGD－ING4联合放疗能明显抑制CNE人鼻咽癌细胞及其移植瘤的生长并诱导其凋亡（P＜0.05），其机制可能与Ad.RGD－ING4联合放疗能显著上调P21、Bax、cleavedCaspase-3和下调Bcl-2、CD34、Survivin、VEGF等基因表达有关，进一步诱导细胞凋亡。
【作者】王奕鸿；
【导师】刘济生；
【作者基本信息】苏州大学，耳鼻咽喉科学，2014，硕士
【关键词】腺病毒；鼻咽癌；ING4；放疗増敏；凋亡；

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