B7-H3对人精子功能影响的初步研究

【摘要】目的：检测精液中B7-H3的含量及其与精液参数之间的关系，及其对人类精子功能的影响。方法：实验共分三部分1.选择83例正常有生育能力的健康男性（年龄22-37岁）和176例不育症（maleinfertiliy）患者（21-38岁），用酶联免疫吸附试验（enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA）检测精液中B7-H3的含量，用计算机辅助精液分析（Computer-assistedsemenanalysis，CASA）检测精液参数，并分析它们的相关性。2.用流式细胞术（flowcytometry，FCM）和荧光显微镜两种方法检测精子表面是否存在B7-H3受体及其分布情况。3.在体外通过用不同浓度的B7-H3与精子共孵育0-4小时后，运用CASA和异硫氰酸荧光素（fluoresceinisothiocyanate，FITC）标记的豌豆凝集素（Pisumsativumagglutinin，PSA）荧光染色法检测精子活力、精子获能及精子顶体反应，观察B7-H3对人类精子功能的影响。结果：1.健康人和不育症患者血清B7-H3含量检测结果分别为4.53±1.12ng/ml和4.49±1.92ng/ml，两组之间差异无统计学意义(P=0.962)。但是，健康人精浆B7-H3的含量(16.67±7.71ng/ml)明显高于不育症患者的B7-H3的含量(7.79±4.27ng/ml,P<0.0001)。我们进一步分析了所有标本B7-H3的含量和精液参数之间的关系。精子前向运动正常的精液标本的B7-H3的含量(11.53±6.36ng/ml)明显高于那些精子前向运动降低的精液标本(5.52±3.39ng/ml，P<0.0001)。此外B7-H3的含量还和精子的曲线速率(r=0.394,P=0.011)，直线速率(r=0.542,P=0.002)，平均路径速率(r=0.498,P=0.003)成正相关关系。精子密度正常标本的B7-H3的含量(10.72±6.44ng/ml)明显高于精子密度偏低的精液标本的B7-H3的含量(6.18±4.03ng/ml，P=0.0007)。2.为了探索精浆B7-H3是否存在调节精子功能的可能性，我们检测人类精子表面是否存在B7-H3受体。结果我们在健康人和不育症患者精子表面均检测到了B7-H3受体。并且在这几类人的精子中B7-H3受体的表达率并无显著统计学差异(P=0.976)。而受体分布主要集中在精子顶体后区，颈部，和中部。3.将精子和不同浓度的B7-H3(0,5,10,25ng/ml)在CO2培养箱中共孵育4小时。用CASA系统在不同时间点检测前向运动精子的百分率。孵育2小时后，与10ng/mlB7-H3孵育的弱精子症患者精子活力的百分率由0小时时的精子活力(26.05±5.39%)增加到33.45±6.91%，增加有统计学意义(P=0.008)。与5ng/mlB7-H3孵育4小时后，健康人精子活力的百分率由70.35±11.71%增加到70.71±11.41%(P=0.872)，差异无统计学意义。同样，与10ng/mlB7-H3孵育4小时的弱精子症患者精子活力的百分率增加到45.76±8.72%(P=0.001)。与10ng/mlB7-H3孵育4小时的健康人的精子活力增加到75.46±8.77%，差异无统计学意义(P=0.087)。用10ng/mlB7-H3孵育的弱精子症患者的精子活力比5ng/mlB7-H3孵育的弱精子症患者的精子活力明显升高(P=0.011)，这表明B7-H3能够提高精子前向运动的百分率，并存在时间和剂量依赖关系。但是，用10ng/ml和25ng/mlB7-H3处理的弱精子症患者的精子活力变化无统计学意义(P=0.897)。此外，B7-H3对精子的获能及顶体反应无显著影响。结论：B7-H3能够提高人类精子的活力，但对精子获能及顶体反应无影响。
【作者】李子刚；
【导师】侯建全；
【作者基本信息】苏州大学，泌尿外科，2014，硕士
【关键词】男性不育；精液；精子活力；B7-H3；受体；

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