海洋防污功能菌株的筛选及其活性物质的研究

【摘要】海洋生物污损是指海洋固着生物(如藤壶、贻贝、盘管虫及海藻等)在人工设施表面的附着积聚。随着海洋产业的不断发展,海洋生物污损带来的危害越发严重。有机锡及氧化亚铜防污涂料在过去几十年间对海洋环境造成了巨大破坏,己被禁用或限用,因此有必要开发环保型海洋防污剂。海洋生物用于化学防御的次级代谢产物是开发环保型防污剂的潜在来源。然而防污活性化合物在生物体内含量低微,供应不足是环保型防污剂发展的主要问题。海洋微生物对污损生物具有生态作用,微生物产生的某些次级代谢产物能够诱导或抑制污损生物的附着。并且可以通过发酵或基因工程手段大规模生产,因此具有巨大开发潜力。本文从浒苔、石莼、山海绵中分离共生、附生微生物,并对其粗提物进行防污活性检测,筛选出防污活性较高的菌株。对该菌株进行鉴定并对其防污活性物质进行分段萃取,以防污活性为导向进一步提取分离,获得防污活性化合物。对所分离化合物以多种海洋污损生物为模型检测其防污活性,并进行海区试验。主要结果如下：1.从浒苔、石莼、山海绵共分离得到14株海洋微生物,结合实验室已有的12株海洋微生物,共获得23株海洋微生物的乙酸乙酯相粗提物及11株海洋微生物的甲醇粗提物。通过活性检测,共筛选到9株具有防污活性的菌株。其中Vibrioalginolyticus,Vibriogallicu两株菌防污活性最高,抑制藤壶幼体EC5o分别为1.92和1.60μg/ml。2.对两株海洋细菌V.alginolyticus和V.gallicus活性物质进行不同相萃取,经活性检测发现的二氯甲烷相和乙酸乙酯相提取物均表现出防污活性。其中V.alginolyticus两相粗提物的EC5o分别为3.9和2.82μg/ml,V.gallicus两相粗提物的EC50分别为3.27及9.57μg/ml。HPLC分析发现V.alginolyticus的二氯甲烷相含有丰富的活性物质。3.对防污活性功能菌株V.alginolyticus4个看家基因(rpoD、toX、rctB、gyrB)序列进行测定。多基因联合分析表明,该菌株与GenBank中V.alginolyticusATCC17749基因同源性最高。rpoD、toX、rctB、gyrB与该菌株的同源性分别为99%、98%、99%和99%。基于16SrDNA、rpoD、rctB、gyrB序列构建的系统发育树均显示,该功能菌株与V.alginolyticusATCC17749亲缘关系最近。结合生理生化特征实验,将该菌株鉴定为V.alginolyticus。4.本文从V.alginolyticus中分离得到两个防污活性化合物,分别是吲哚和L-脯氨酸-D-亮氨酸。分离得到的其他化合物有3-醛基-吲哚、邻苯二甲酸丁酯与对羟基苯甲醛1：1的混合物。
【作者】王祥；
【导师】冯丹青；
【作者基本信息】厦门大学，海洋生物学，2014，硕士
【关键词】海洋细菌；生物污损；活性筛选、附着抑制、分离纯化；

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