核苷（酸）类似物在抗乙肝病毒治疗过程中宿主的免疫应答研究

【摘要】目的：检测抗病毒治疗过程中慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血中的T、B、NK免疫细胞及其血清中细胞因子IL-2,IFN,TNF,IL-4,IL-6和IL-10的表达水平，并与肝脏功能及病毒载量之间进行相关性分析，探讨其对免疫应答的影响。方法：选取2010年9月至2012年10月就诊于吉林大学第一医院门诊及入院的HBeAg阳性CHB患者，签署知情同意后进行筛选试验，其中有54例应用替比夫定初治疗、30例对阿德福韦酯耐药的患者转用恩替卡韦治疗，对照组为20例年龄、性别相匹配的健康人。通过流式细胞技术、微量样本多指标流式蛋白定量技术（CytometricBeadArray，CBA）检测各组CHB患者外周血中CD3-CD56+,CD244+NK,CD3+,CD3+CD4+,CD3+CD8+,CD4+CD25+Foxp3+,CD4+CD25+CD127lowT,CD19+CD27+B细胞以及血清中CD4+T细胞相关的细胞因子（IL-2,IFN,TNF,IL-4,IL-6,IL-10）的含量。应用罗氏公司全自动生化分析仪检测ALT、AST的水平；应用雅培公司化学发光分析仪检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb；应用荧光定量PCR方法检测HBVDNA病毒载量的变化。分析治疗前后各相应免疫指标与HBVDNA病毒载量、ALT、AST之间的相关性。结果：初始应用替比夫定治疗的HBeAg阳性CHB患者组：(1)CHB患者经替比夫定治疗后，HBVDNA病毒载量、HBsAg乙肝表面抗原定量以及肝功ALT、AST水平较基线时呈下降趋势，治疗3月、6月、9月、13月后，以上各项指标与基线及健康对照组相比，均明显下降（P<0.05）;在治疗3月、6月、9月、13月后，分别有5、8、12、15例HBeAg阳性患者出现HBeAg血清学转换;（2）CHB患者经替比夫定治疗后，CD3+CD4+、CD4+CD25+Foxp3+、CD4+CD25+CD127lowT、CD8+PD-1+T细胞的绝对数呈下降趋势，而CD3-CD56+、CD244+NK、CD3+CD8+T细胞的绝对数以及血清中CD4+T细胞分泌的细胞因子（IL-2,IFN,TNF,IL-4,IL-6，IL-10）的含量呈现上升趋势;（3）CHB患者血清中CD4+T细胞相关的细胞因子（IL-2,IFN,TNF,IL-4,IL-6,IL-10）的水平与HBVDNA病毒载量以及肝功ALT、AST的水平呈明显的负相关。阿德福韦疗效不佳转用恩替卡韦治疗的HBeAg阳性CHB患者组：（1）阿德福韦酯耐药的CHB患者转用恩替卡韦治疗后，HBVDNA病毒载量、HBsAg乙肝表面抗原定量以及肝功ALT、AST水平较基线时呈下降趋势，治疗3月、6月后，以上各项指标与基线及健康对照组相比，均明显下降（P<0.05）;在治疗3月、6月后，分别有4、11例HBeAg阳性患者出现HBeAg血清学转换；（2）阿德福韦酯耐药的CHB患者转用恩替卡韦治疗后，CD3+CD4+、CD4+CD25+Foxp3+、CD4+CD25+CD127lowT、CD19+CD27+B细胞的绝对数呈下降趋势，而CD3-CD56+、CD244+NK、CD3+CD8+T细胞的绝对数以及血清中CD4+T细胞分泌的细胞因子（IL-2,IFN,TNF,IL-4,IL-6）的含量呈现上升趋势，而IL-10治疗前后无明显变化;（3）阿德福韦酯耐药的CHB患者转换为恩替卡韦治疗后，血清中CD4+IFN+T细胞的水平与HBVDNA病毒载量以及肝功ALT、AST的水平呈明显的负相关。结论:1、CHB患者存在免疫耐受或者免疫功能低下的状态；2、发现在抗病毒治疗后CHB患者免疫细胞及细胞因子与未用药前相比均有显著的升高，表明核苷（酸）类似物可能通过免疫调节起到抑制病毒的作用；3、阿德福韦酯耐药的CHB患者转用恩替卡韦治疗后取得较好的治疗效果，表明恩替卡韦可以作为阿德福韦酯耐药患者的替代治疗；4、在抗病毒治疗前后，CHB患者血清中CD4+T细胞分泌的细胞因子（IL-2,IFN,TNF,IL-4,IL-6、IL-10）的水平与HBVDNA以及肝功ALT、AST的水平具有一定的相关性，表明血清中细胞因子水平与抗病毒治疗后病毒复制情况密切相关；5、CHB患者血清中CD4+T细胞分泌的细胞因子在抗病毒早期可以作为CHB患者治疗过程中的一项临床监测指标，为确定核苷酸类似物治疗疗程提供了新的思路，具有一定的临床意义。
【作者】马亮；
【导师】姜艳芳；
【作者基本信息】吉林大学，内科学，2014，硕士
【关键词】慢性乙型肝炎病毒；抗病毒治疗；淋巴细胞亚群；流式细胞术；微量样本多指标流式蛋白定量技术；

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