AG型单链寡聚脱氧核苷酸对CpG ODN刺激RAW264.7细胞分泌HMGB1的影响

【摘要】目的：本研究旨在研究MS1（9一种AG型单链寡聚脱氧核苷酸）对CpGODN刺激RAW264.7细胞引起的HMGB1蛋白表达水平及分泌的影响，进而阐明MS19减轻H1N1流感病毒诱导的小鼠急性肺损伤模型病理损伤的治疗机制。方法：1、实验分为对照组、CpGODN刺激组、MS19刺激组、CpGODN+MS19刺激组，显微镜下观察各组在刺激不同时间后对小鼠RAW264.7细胞生长状态的影响。2、用实时荧光定量PCR方法检测MS19对CpGODN刺激RAW264.7细胞HMGB1mRNA水平的影响。3、用免疫荧光法检测MS19对CpGODN刺激RAW264.7细胞HMGB1蛋白定位的影响。4、用Westernblot方法检测MS19对CpGODN刺激RAW264.7细胞胞内HMGB1蛋白量的影响。结果：1、显微镜下观察各组刺激RAW264.7细胞不同时间后细胞的生长状态：各组细胞用CpGODN、MS19、CpGODN+MS19刺激RAW264.7细胞6h/12h/18h后细胞生长状态与对照组相比无明显异常，细胞均贴壁生长，密度均匀，折光度强，数量明显增多，细胞状态良好，形态大体一致，轮廓清楚。2、实时荧光定量PCR结果显示CpGODN刺激组、MS19刺激组及MS19联合CpDODN刺激组刺激RAW264.7细胞不同时间段后，HMGB1mRNA水平与对照组对比无明显差异。3、免疫荧光法观察MS19作用18h时对CpGODN刺激的RAW264.7细胞HMGB1蛋白定位影响，可见CpGODN刺激组与对照组对比，两组细胞内、外均可见绿色荧光，CpGODN刺激组细胞外荧光强度较对照组强。MS19刺激组与对照组对比，对照组细胞内、外均可见绿色荧光，而MS19刺激组绿色荧光主要定位在细胞内及细胞膜处。CpGODN刺激组与CpGODN联合MS19刺激组对比，两组细胞内、外均见绿色荧光，而CpGODN联合MS19刺激组荧光定位以细胞内为主。4、用westernblot法检测胞内HMGB1蛋白量，结果显示：用相应ODN刺激48h后，CpGODN刺激组、MS19刺激组及CpGODN联合MS19刺激组细胞内HMGB1蛋白量与对照组比较无明显差异；刺激72h后，CpGODN刺激组与对照组比较细胞内HMGB1蛋白减少，MS19刺激组及CpGODN联合MS19刺激组与对照组比较细胞内HMGB1蛋白增多，CpGODN联合MS19刺激组细胞内HMGB1蛋白量处于CpGODN刺激组与MS19刺激组细胞内HMGB1蛋白量之间。结论：1、MS19对RAW264.7细胞的细胞生长状态无明显影响。2、MS19对RAW264.7细胞HMGB1mRNA水平无明显影响。3、MS19能够抑制CpGODN刺激RAW264.7细胞分泌的HMGB1蛋白自胞内向胞外转移。
【作者】刘洁；
【导师】宋丽君；
【作者基本信息】吉林大学，儿科学，2014，硕士
【关键词】寡聚脱氧核苷酸；HMGB1；RAW264.7细胞；免疫反应；

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