丙戊酸和伏立诺他联合阿糖胞苷诱导白血病细胞凋亡机制研究

【摘要】儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）在过去30年间治疗上取得了重大成就，治愈率高达80%以上，而急性髓细胞白血病（AML）的治疗效果尚无明显改善，青少年AML患者的整体生存率仅有40-45%[1]。其中，阿糖胞苷（Ara-c）化疗抵抗是导致其治疗失败的主要原因之一。如何提高化疗缓解率、避免复发、争取长期存活甚至治愈仍是AML治疗的难点。目前已研究和开发出多种换代的化疗药物、直接或间接的靶向药物、以及能增强化疗药物细胞毒性的组蛋白去乙酰化酶抑制剂等单独或联合应用，但相比标准方案,尚未发现特别有效的药物能够显著改善治疗效果[2]，因此需继续寻找新的治疗AML的药物、研究效果更好的治疗策略。急性巨核细胞白血病(AMKL)为AML的M7亚型，化疗效果差，为高危亚型，完全缓解率低于35%[3]。然而，伴有唐氏综合征的AMKL患儿治疗缓解率可达80%以上，明显高于其它型AMKL，主要原因为转录因子GATA-1外显子2存在体细胞突变。既往研究亦证实：体内GATA1高表达与白血病治疗预后高度相关，GATA1高表达的AML患者预后差、GATA1低表达AML者预后相对好[4,5]。多中心研究证明AML存在遗传学及表观遗传学异常，为新治疗措施的采用提供理论基础[6]。目前，多种组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACI)已经进入临床试验阶段，且证实对血液系统恶性疾病及实体肿瘤具有治疗作用。丙戊酸（VPA）和伏立诺他（SAHA)均为FDA批准用药，对白血病细胞的作用明确，与Ara-c均存在协同作用。研究表明：VPA可提高人成巨核细胞白血病细胞对Ara-c的反应并降低转录因子GATA-1表达[7]。实验目的：通过检测转录因子GATA-1表达及阿糖胞苷代谢酶基因表达水平的变化，探讨VPA提高Ara-c对白血病细胞化疗敏感性机制；探讨SAHA提高Ara-c对白血病细胞化疗敏感性机制；探讨两种组蛋白去乙酰化酶抑制剂VPA和SAHA共同联合Ara-c对白血病细胞化疗敏感性机制。实验方法：1.不同浓度梯度的VPA组、SAHA组、Ara-c组分别作用于白血病细胞（Dami），用MTT方法检测其对Dami细胞的增值抑制作用。2.不同浓度梯度VPA联合Ara-c、SAHA联合Ara-c用药，用MTT方法检测其对Dami细胞的增值抑制作用，计算联合指数CI值。3.VPA和SAHA共同联合Ara-c用药，用MTT方法检测其对Dami细胞的增值抑制作用。4.用碘化丙啶（PI）单染法测定VPA和SAHA分别及联合用药24h、48h后对Dami细胞周期的影响。5.用RT-PCR方法检测VPA和SAHA分别及联合用药48h后转录因子GATA-1、胞苷脱氨酶(CDA)及脱氧胞苷激酶（DCK)mRNA水平的变化。实验结果：1.VPA、SAHA及Ara-c单独用药时可抑制白血病Dami细胞增殖，促进细胞凋亡，抑制作用随着时间延长和/或剂量增加而增强。2.VPA联合Ara-c组、SAHA联合Ara-c组均抑制Dami细胞增殖，抑制率明显高于各单独用药组（P＜0.01），CI值均＜1，具有协同性。3.VPA和SAHA共同联合Ara-c用药组抑制Dami细胞增殖，抑制率明显高于VPA联合Ara-c组、SAHA联合Ara-c组（P＜0.01）。4.Dami细胞经过VPA和SAHA处理后出现细胞周期阻滞现象，主要阻滞在G1期。与对照组比较，各给药组细胞G1期所占比例显著增加，S期所占比例显著降低（P＜0.01），G2期所占比例无明显差异（P＞0.05）。24h时，VPA联合SAHA用药组G1期细胞所占比例与单独用药组无明显差别（P＞0.05）。48h时，VPA联合SAHA用药组G1期细胞所占比例高于SAHA组（P＜0.05），与VPA组无明显差别（P＞0.05）。随着时间的延长，G1期细胞所占百分比呈上升趋势，呈时间依赖性。5.VPA组、SAHA组与联合用药组GATA-1和CDAmRNA表达水平低于对照组（P＜0.05）、各组间无明显差异（P＞0.05）；VPA组DCKmRNA表达水平高对照组（P＜0.05）、SAHA组与对照组无明显差异（P＞0.05）、联合用药组DCKmRNA表达水平高于VPA组和SAHA组（P＜0.05）。实验结论：1.VPA和SAHA共同联合Ara-c用药能够显著增加对Dami细胞的抑制作用，抑制率明显高于VPA联合Ara-c组和SAHA联合Ara-c组。2.VPA和SAHA分别及联合用药使Dami细胞阻滞在G1期。随时间延长，G1期阻滞作用逐渐增强。48h时，VPA联合SAHA用药组G1期阻滞作用较SAHA组明显增强，但与VPA组无明显差异。3.VPA和SAHA单独或联合用药均可降低Dami细胞GATA-1、CDAmRNA表达水平；VPA使DCKmRNA高表达、SAHA对DCKmRNA表达无影响；VPA联合SAHA用药可显著增加DCKmRNA表达水平，而GATA-1、CDAmRNA表达水平降低与各单独用药无显著差异。
【作者】何永艳；
【导师】李春怀；
【作者基本信息】吉林大学，儿科学，2014，硕士
【关键词】白血病；组蛋白去乙酰化酶抑制剂；丙戊酸；伏立诺他；阿糖胞苷；

【参考文献】
[1]范文礼,刘志刚.隐性故障对小世界电网连锁故障的影响分析[J].电力系统自动化,2013,21:23-28.
[2]曹扶生.东西部地区经济合作与联动发展研究[D].华东师范大学,人文地理学,2000,硕士.
[3]戴晓晖,李敏强,寇纪淞.遗传算法理论研究综述[J].控制与决策,2000,03:263-268+273.
[4]关改霞.L农产品物流园区规划方案技术经济评价[D].北京交通大学,2013.
[5]吕文静.锦州电信CDMA无线网络优化技术研究[D].吉林大学,电子与通信工程,2014,硕士.
[6]于显耀.数字调制信号调制识别及参数估计问题研究[D].大连理工大学,信号与信息处理,2013,硕士.
[7]李聪.风电机组接地计算及测量研究[D].北京交通大学,2015.
[8]王寅.江苏省高星级酒店薪酬体系优化设计研究[D].扬州大学,旅游管理,2012,硕士.
[9]李岩.基于战略导向的A房地产公司人力资源管理体系构建研究[D].吉林财经大学,工商管理（专业学位）,2014,硕士.
[10]史文虎.旅游房地产营销模式研究[D].西南财经大学,工商管理,2003,硕士.
[11]刘波,孙红娟,彭同江.石墨烯分子振动模式因子群分析与密度泛函计算[J].物理化学学报,2012,04:799-804.
[12]范爽.关于“课业负担”的若干基本理论问题研究[D].沈阳师范大学,教育学原理,2013,硕士.
[13]张小翠.冷链物流信息处理与安全风险管理研究[D].河北工程大学,管理科学与工程,2012,硕士.
[14]杨明.汉语国际推广的公共外交意义[D].山东大学,汉语国际教育（专业学位）,2013,硕士.
[15]杨镇源.混凝土泵车臂架系统结构动态特性分析及减振研究[D].重庆大学,机械设计及理论,2014,硕士.
[16]曹鹏.套管稳定性与螺纹连接强度的计算分析与实验研究[D].华中科技大学,固体力学,2013,硕士.
[17]刘清泉.重力、电法资料在二连盆地区域构造研究中的应用[J].石油地球物理勘探,1987,04:421-426.
[18]李彦龙.对汽车造型设计与文化关系的研究[D].吉林大学,设计艺术学,2004,硕士.
[19]胡明.基于知识创新的产业链升级研究[D].贵州大学,管理科学与工程,2014,硕士.
[20]陈孝昌.后期维特根斯坦的遵守规则和意义[D].复旦大学,科学技术哲学,2012,硕士.
[21]王艳辉.基于进化多目标优化的演化聚类及其应用研究[D].西安电子科技大学,电路与系统,2012,硕士.
[22]哈斯达来.公路建设市场信用管理系统研究与应用[D].长安大学,交通运输工程（专业学位）,2013,硕士.
[23]陈荣伟,潘炜.PB中数据多维分析框架的设计和实现[J].电脑编程技巧与维护,2002,07:17-18+21.
[24]熊紫娟.X市公立中医医院资源整合实施情况及对策研究[D].北京中医药大学,社会医学与卫生事业管理,2013,硕士.
[25]张鲁兵.基于粒子群算法的精炼炉供电曲线的多目标优化[D].东北大学,控制理论与控制工程,2010,硕士.
[26]刘艳.论摇篮网在当前市场条件下的广告策略[D].对外经济贸易大学,2002.
[27]李旸,高正光,李启炎.基于神经网络与遗传算法的数据挖掘体系结构[J].计算机工程,2004,06:155-156.
[28]李思遥,李雄彦,薛素铎.套筒式节点受拉力学性能试验及有限元分析[J].工业建筑,2015,01:1.
[29]一丁.烧结混合料湿度连续测试装置——PIER红外线测湿器的结构和工作原理[J].冶金自动化,1980,04:51-54.
[30]张静.浅析徽州木雕的艺术特色[D].山西师范大学,美术学,2014,硕士.
[31]郑冰.缺失数据下半参数变系数EV模型的统计推断[D].首都经济贸易大学,统计学,2013,硕士.
[32]王世伟.高速铁路区段通过能力计算及其系统开发[D].北京交通大学,交通运输规划与管理,2013,硕士.
[33]高亚男.单层工业厂房再利用投资决策风险识别及量化研究[D].西安建筑科技大学,土木工程建造与管理,2013,硕士.
[34]王玉龙.劣质数据上真值发现关键技术研究[D].哈尔滨工业大学,计算机科学与技术,2014,硕士.
[35]王长安.网络遥操作通讯平台设计与实现[D].华中科技大学,机械设计及论,2013,硕士.
[36]张奎.面向烟草销售行业CRM管理系统[D].山东大学,2005.
[37]李良.长治市初中运动技能教学现状的调查与研究[D].内蒙古师范大学,运动训练（专业学位）,2013,硕士.
[38]宁维赛.商业智能在医院辅助决策系统中的应用[D].厦门大学,计算机系统结构,2013,硕士.
[39]李杰.四相低相关伪随机序列族的构造[D].湖北大学,基础数学,2012,硕士.
[40]邱闽文.高层建筑地下室结构施工的逆作法研究与应用[D].重庆大学,2003.
[41]李淑娟.中国反恐怖主义法律对策研究[D].兰州大学,刑法学,2012,硕士.
[42]张坤.零维镍（钴）基簇合物的合成、“固—液结构转换”及性质研究[D].西北大学,材料化学,2013,硕士.
[43]周朝清.影响股骨髁部支撑钢板治疗股骨远端骨折手术疗效的相关因素分析[D].遵义医学院,外科学（专业学位）,2012,硕士.
[44]翟庆生.基于土层结构的场地分类方法的研究[D].中国地震局工程力学研究所,防灾减灾工程及防护工程,2003,硕士.
[45]马伟钦.利用蛋白质组学构建大肠癌肝转移诊断模型[D].广东药学院,消化内科学,2012,硕士.
[46]赵娟.地图编辑器在苹果手机游戏设计中的开发与应用[D].北京工业大学,软件工程（专业学位）,2013,硕士.
[47]刘明明.PPO/PS共混体系力学性能及形态结构的研究[D].长春工业大学,材料学,2013,硕士.
[48]徐锋,张爱珍,王厚立.聚类算法在木材缺陷图像分割中的应用[J].信息技术,2005,10:64-66+107.
[49]郭居上.温度场中复合材料板与铝合金板钉接结构内应力研究[D].哈尔滨工业大学,固体力学,2013,硕士.
[50]陈飞云,李光,吕晓林,佘翊妮,宁晓斌.基于多学科协同仿真的液压系统性能匹配研究[J].机电工程,2014,05:573-577.