组织工程化人工食管的体外研究

【摘要】目的：以天然管状ECM为支架，BMSCs为种子细胞，将BMSCs接种于ECM上进行复合培养，探讨组织工程化人工食管体外培养的可行性，进而为组织工程化人工食管体内植入研究提供实验依据。方法：使用特制的刮除器，通过物理刮除及化学方法一系列处理后，制取管状的ECM，将多层管状ECM使用球囊及模具套叠后塑型，制备出天然管状的ECM支架，运用扫描电镜及光学显微镜进行超微结构观察和组织学观察。以粒子加速器对ECM支架进行辐照灭菌；分离提取犬BMSCs，体外培养、扩增、诱导，并进行流式细胞学鉴定，绘制BMSCs的生长曲线；将BMSCs接种于ECM进行复合培养，并与人工材料ePTFE做对比研究，行HE染色观察比较。结果：1、经处理过后所得ECM为白色菲薄、质地柔软、弹性良好的半透明膜状物，采用球囊、支架塑形所制得的天然管状ECM成形良好，经扫描电镜及HE染色观察可见ECM具有三维网状的立体空间结构，表面无细胞成分残留；采用粒子加速器以25KGy辐照对ECM灭菌后进行细菌培养，结果显示灭菌效果良好。2、犬骨髓血经过一系列处理、离心、体外培养后镜下可见大量漩涡状贴壁生长的细胞集落，扩增培养后取第三代细胞经流式细胞仪检测，CD29、CD44、CD90、CD105表达率分别为95.7%、98.4%、99.0%和100%，几乎不表达CD34、CD45，符合BMSCs的抗原表达。3、BMSCs与ECM接种复合培养的实验组经HE染色后可见大量蓝染的细胞核结构，呈铺路石样，连接紧密，孔隙内亦可见细胞生长；在与BMSCs的接种复合率方面，ECM优于人工材料ePTFE。结论：ECM具有良好的三维空间结构，孔隙均匀、相互贯通，经塑形、灭菌后的ECM是组织工程支架材料的良好选择，BMSCs体外分离、存化、扩增及鉴定等易于操作，而且BMSCs具有多分化潜能，是组织工程中种子细胞的最佳选择，将BMSCs接种于ECM进行体外复合培养，构建组织工程化人工食管具有可行性。
【作者】李春霖；
【导师】崔建华；
【作者基本信息】吉林大学，外科学，2014，硕士
【关键词】骨髓间充质干细胞；细胞外基质；组织工程；人工食管；

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