CFTR对肺腺癌细胞增殖、迁移和凋亡影响的研究

【摘要】肺癌是世界上最常见一种恶性肿瘤，且死亡率非常高，肺癌主要包括非小细胞肺癌和小细胞肺癌，非小细胞肺癌占其总数的80％，肺腺癌占非小细胞肺癌的32-40％，因此，肺腺癌是肺癌中的主要类型之一。目前，治疗肺癌的主要方法有手术治疗、放射治疗、化学治疗和生物治疗。早期肺腺癌应首选手术治疗，但是，由于肺腺癌的早期症状只是呼吸困难，发热等常见的症状，很容易被忽视。因此，肺腺癌患者经常错过最佳治疗时机。目前，已经有肿瘤晚期患者受益于基于个体内肿瘤可识别分子的免疫治疗，这种治疗方法没有化疗药物的副作用，也没有放疗过程中肿瘤细胞和正常细胞均被杀死的现象。因此，对有效的治疗靶点的筛选和研究具有重要的意义。有报道发现，CFTR基因(囊性纤维化跨膜传导调节因子)的突变可能提高或降低某些肿瘤发生的危险。肿瘤的发展过程中包括了增殖、迁移和凋亡等方面。因此，本研究主要通过免疫组织化学法、TUNEL染色法、MTT和CCK-8法、免疫荧光法、划痕实验、Hoechst33342染色和流式细胞术等方法探讨CFTR在肺腺癌细胞和肺腺癌细胞系Calu-3的增殖、迁移和凋亡过程中的作用。方法：本研究包括体内和体外实验两部分。体内实验，肺腺癌组织收集于吉林省肿瘤医院，常规石蜡包埋、切片，切片厚5μm，行免疫组织化学和TUNEL法染色。体外实验，常规培养肺腺癌细胞Calu-3，加入CFTR激活剂（Genistein）、CFTR特异性抑制剂（CFTRinh-172），利用MTT和CCK-8法检测Calu-3细胞经药物作用后的增殖情况，并确定药物最适浓度。然后，用药物最佳浓度分别处理Calu-3细胞，即为CFTR激活剂组和CFTR抑制剂组。免疫荧光法检测CFTR激活剂和抑制剂组的CFTR蛋白的表达差异，划痕实验检测其迁移差异，Hoechst33342染色、流式细细胞术（FCM）检测其细胞凋亡的情况。结果：免疫组织化学结果为：CFTR在高分化肺腺癌细胞中呈高表达；CFTR在低分化肺腺癌细胞中表达，但是表达较弱。TUNEL染色结果中，高分化肺腺癌组织的肿瘤细胞凋亡率为x±s=0.2316±0.0133，低分化肺腺癌组织的凋亡率为x±s=0.1175±0.0611。MTT法检测Genistein的最佳浓度为12.5μM、25μM、50μM/48h，CCK-8染色法检测CFTRinh-172的最佳浓度为5μM、10μM、20μM/48h；且Genistein能够抑制Calu-3的增殖，而CFTRinh-172能够促进Calu-3的增殖。免疫荧光检测结果显示：Genistein组CFTR蛋白表达（1.266±0.059）和CFTRinh-172组CFTR蛋白表达（1.340±0.006）分别与对照组CFTR蛋白表达（1.292±0.058）相比，无显著性差异（P=0.619>0.05，P=0.225>0.05）。划痕实验检测显示：25μM72hGenistein组细胞迁移数量（90.53±4.06）个与72h对照组细胞迁移数量（244.1±18.38个）相比具有显著性差异（P=0.000<0.01）；10μM48hCFTRinh-172组细胞迁移数量（148.3±17.70）个与48h对照组细胞迁移数量（134.1±10.04个）相比无显著性差异（P=0.268>0.05）。Hoechst染色结果和流式细胞术结果为：激活剂组细胞凋亡数量（17.33±2.08个）和凋亡率（9.52%±2.22%）分别高于对照组细胞凋亡数量（1.33±0.58个）（P=0.000<0.01）和凋亡率（3.79%±1.24%）（P=0.018<0.05），且具有显著性差异。结论：CFTR在高分化肺腺癌细胞中的表达量高于其在低分化肺腺癌细胞中的表达量，提示，CFTR参与肺腺癌细胞分化；高分化肺腺癌组织的肿瘤细胞凋亡率高于低分化肺腺癌组织中的细胞凋亡率，且CFTR的表达与肺腺癌细胞凋亡率之间存在相关性，提示，CFTR参与肺腺癌细胞的凋亡；Genistein通过促进CFTR氯离子通道开放，抑制肺腺癌肿瘤细胞Calu-3的增殖、迁移，并促进Calu-3的凋亡，提示，CFTR氯离子通道的开放能够抑制Calu-3的增殖和迁移、且促进其凋亡；CFTRinh-172通过抑制CFTR氯离子通道开放，促进了Calu-3的增殖。
【作者】李亚秋；
【导师】郝利铭；
【作者基本信息】吉林大学，人体解剖与组织胚胎学，2014，硕士
【关键词】CFTR；肺腺癌；增殖；迁移；凋亡；

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