阿维A联合干扰素-α对人皮肤T细胞淋巴瘤细胞株HUT78作用的研究

【摘要】皮肤T细胞淋巴瘤(cutaneousTcelllymphoma,CTCL）主要分为蕈样肉芽肿（granulomafungoides）和塞扎里综合征（sezarysyndrome），是发生于皮肤的恶性肿瘤，此类肿瘤细胞具有较强的浸润能力,可侵入表皮、淋巴结和内脏,发病率逐年上升,在非何杰金淋巴瘤中已经升至第2位，严重影响人类的身体健康。其中蕈样肉芽肿又称蕈样霉菌病(mycosisfungoides,MF)，最初只侵犯皮肤，表现为红斑或斑块，若不及时治疗，会发展到肿瘤期，最终影响患者的生命。若在早期给予强烈的放疗或化疗，会给患者带来很大的精神压力，同时会给患者的健康带来危害。因而，针对不同时期选择合适的药物成为皮肤T细胞淋巴瘤治疗领域的研究热点。维A酸类药物是一组与天然维生素A结构类似的化合物，可调节上皮细胞和其他细胞的生长和分化，对恶性细胞生长有抑制作用，还可调节免疫和炎症过程等。干扰素是病毒或其诱导剂诱导人体细胞产生的一种糖蛋白，有病毒抑制、抗肿瘤及免疫调节作用。目前应用于临床的人干扰素有α-干扰素（白细胞干扰素）、β-干扰素、（成纤维细胞干扰素）、γ-干扰素（免疫干扰素）。维A酸和干扰素皆为分化诱导剂，两者联合应用，可提高肿瘤对药物的敏感性，从而提高治疗效果。但在皮肤T细胞淋巴瘤方面的研究鲜有报道。目的：通过检测不同浓度的阿维A、IFNα及两者联合应用对人皮肤T细胞淋巴瘤Hut78细胞株的增殖抑制作用及IL-15表达的影响,探讨阿维A和IFNα抑制人皮肤T细胞淋巴瘤增殖过程中的作用及可能机制。为干扰素-α、维A酸治疗皮肤T细胞淋巴瘤提供理论依据。方法：1细胞培养将HUT78细胞培养于含20%胎牛血清的IMDM培养基（含青霉素100U/ml，含链霉素100U/ml，PH7.2）中，置于37℃、饱和湿度、5%CO2的培养箱内常规传代培养。2CCK8法检测阿维A和IFNα对人HUT78细胞增殖抑制的影响。2.1不同浓度阿维A（0.1umol／L﹑1.0umol／L﹑10umol／L）[1]作用HUT78细胞24﹑48﹑72h后对细胞增殖的影响。2.2不同浓度IFNα(5000IU/ml﹑10000IU/ml﹑20000IU/ml)[2]分别作用HUT78细胞24﹑48﹑72h后对细胞增殖的影响。2.3联合应用不同浓度阿维A和IFNα（1.0umol／Lacitretin+5000IU/mlIFNα、1.0umol／Lacitretin+10000IU/mlIFNα、1.0umol／Lacitretin+20000IU/mlIFNα）[1]作用24﹑48﹑72小时后对HUT78细胞增殖的影响。3倒置相差显微镜观察各组药物处理人HUT78细胞后对细胞分化及形态的影响。4应用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组药物处理后人HUT78细胞的IL-15表达情况。5实验结果应用SPSS13.0统计包进行方差分析,以P<0.05有统计学意义。结果：1CCK8法测定处理因素对人HUT78细胞增殖的影响（增殖抑制率）。1.1阿维A组各组间的差异有显著性（p＜0.05）。随着阿维A浓度的增加和时间的延长，对人HUT78细胞的增殖抑制作用逐渐增强。1.2IFNα组各组间的差异有显著性（p＜0.05）。随着IFN-α浓度的增加和时间的延长，对人HUT78细胞的增殖抑制作用逐渐增强。1.3阿维A联合IFNα组各组间的差异有显著性（p＜0.05）。不同浓度的联合组对人HUT78细胞的抑制作用呈现明显的浓度依赖效应关系和时间依赖效应关系。联合用药组与单用相比抑制作用明显增强,且抑制作用随浓度的增加而递增。差异有显著性（p＜0.05）。2阿维A及IFN-α对人HUT78细胞分化及形态的影响阴性对照组细胞圆形或椭圆形，悬浮生长，均匀分布，部分聚集成团状，大小较一致，增殖旺盛；阿维A作用24小时后，HUT78细胞生长较差，细胞固缩﹑破裂，部分坏死，形成细胞碎片，随阿维A浓度的增加和作用时间的延长，上述现象更加明显；IFNα作用HUT78细胞后，细胞呈双极性改变，变得狭长，破裂的细胞增多，随着IFNα浓度的增加及作用时间延长，上述现象更加明显；两者联合应用组细胞增值抑制更加明显，细胞数目显著减少，细胞碎片明显增多。3酶联免疫吸附法测定阿维A及IFNα作用前后对人HUT78细胞IL-15的表达情况。与阴性对照组相比，各药物处理组HUT78细胞IL-15的表达降低，并随药物浓度增加及作用时间的延长，降低的程度愈加明显。进一步进行组间比较差异具有显著性（p＜0.05）。结论：1．阿维A和IFNα均对HUT78细胞的增殖有抑制作用，并且随着浓度的增加和时间的延长，两者对HUT78细胞增殖的抑制率表现出浓度依赖性和时间依赖性。2．阿维A联合IFNα对HUT78细胞的增殖抑制作用优于单独应用阿维A或IFNα，两者者联合应用具有协同作用。3．阿维A联合IFNα对HUT78细胞的抑制作用可能与下调IL-15的表达有关，这可能与其抑制肿瘤增殖的机制有关。
【作者】于凯；
【导师】夏建新；
【作者基本信息】吉林大学，临床医学，2014，硕士
【关键词】阿维A；干扰素-α；皮肤T细胞淋巴瘤；HUT78细胞；白介素15；增殖抑制；

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