左乙拉西坦对CD8~+T淋巴细胞凋亡和细胞毒性功能的影响

【摘要】目的：以往的临床研究显示,接受左乙拉西坦(LEV)治疗的患者常常伴有较高的感染发病率(主要是感冒),但机制不明。在我们的前期临床试验中,发现接受左乙拉西坦治疗的患者外周静脉血中CD8+T淋巴细胞计数有下降的趋势。本研究的重点是调查左乙拉西坦在体外对CD8+T淋巴细胞凋亡和细胞毒性功能的影响,同时与丙戊酸钠进行比对(VPA)。方法：分离外周血单核细胞,在不同药物浓度下观察左乙拉西坦和丙戊酸钠对CD8+T淋巴细胞凋亡和病毒多肽(CEF)诱发的细胞毒性功能的影响。采用的药物浓度分别是：左乙拉西坦5或50mg/L,丙戊酸钠10或100mg/L。外周血单核细胞分别在以上药物浓度下体外培养1h和24h,采用流式细胞仪对比观察凋亡率,CD8+T淋巴细胞的凋亡定义为CD3+/CD8+/Annexin+/PI-。在细胞毒性功能的研究中,病毒多肽诱导特异性CD8+T淋巴细胞的激活后,在不同药物浓度下,采用流式细胞仪对比观察穿孔素释放、CD107+表达率和CFSE稀释法显示的细胞增生。CD8+T淋巴细胞的脱颗粒效应通过细胞内的穿孔素减少和细胞表面的CD107+增加来表示。采用流式细胞仪分析和Westemblot分析检测SV2A在人CD8+T淋巴细胞中的表达。结果：在病毒多肽刺激后2h,高浓度(50mg/L)和低浓度(50mg/L)的左乙拉西坦均显著抑制了CD8+T淋巴细胞的穿孔素释放(LEV50mg/LvsCEF25.8±12.9%vs18.2±9.7%,p<0.01；LEV5mg,LvsCEF:24.1±13.7&vs18.2±9.7%,p<0.01:n=15)和CD107+表达率的增加(LEV50mg/LvsCEF:5.3±2.5%vs11.5±4.7%,p<0.01:LEV5mg/LvsCEF:6.7±2.2%vs11.5±4.75%,p<0.01；n=15),但在病毒多肽刺激后5h,仅有高浓度(50mg/L)的左乙拉西坦保持了针对CD107+表达率增加的抑制效应(LEV50mg/LvsCEF:13,97±4.71%vs18.43±6.68%,p<0.05:n=15).左乙拉西坦对CD8+T淋巴细胞的凋亡和病毒多肽诱导的增生无明显影响(p>0.05)。高浓度的丙戊酸钠(100mgiL)显著抑制了CD8+T淋巴细胞在体外的自发性凋亡(VPA100mg/Lvs对照组：7.8±3,4%vs11.5±4.2%,p<0.01,n=15),但丙戊酸钠组未显示其他具有统计意义的效应差异(p>0.05)。人CD8+T淋巴细胞中存在SV2A。结论：我们的研究发现,左乙拉西坦对病毒多肽诱导的CD8+T淋巴细胞脱颗粒反应具有中度的抑制效应。这一发现不仅有助于解释左乙拉西坦治疗伴发的高感染率,而且提示了左乙拉西坦的一种新的抗癫痫机制,即有可能通过减少穿孔素的释放而减轻血脑屏障的破坏。SV2A在人CD8+T淋巴细胞中的表达有助于上述现象的解释。
【作者】李刚；
【导师】汪昕；
【作者基本信息】复旦大学，神经病学，2011，博士
【关键词】左乙拉西坦；丙戊酸钠；CD8~+T淋巴细胞；凋亡；细胞毒性；SV2A；

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