北山羊成纤维细胞体外培养体系的建立及特性分析

【摘要】北山羊为国家一级保护动物,本研究将获取的北山羊肌肉组织采用组织块法培养,进行了原代培养、传代培养、冷冻与复苏,建立了北山羊肌肉组织成纤维细胞的体外培养体系,对所培养细胞部分的生物特性进行了分析研究,并对在4种不同的培养基中、5种不同血清浓度梯度下细胞的生长状态进行了比较。结果显示：北山羊肌肉组织成纤维细胞在体外培养的过程中,正常生长,其组织块在接种5d后,可观察到有梭形细胞出现,并从组织块向外周爬出,7d后多数游离出组织块并逐渐汇合。在细胞F5、F10、F15代,分别进行了细胞生长动力学的检测：计算贴壁率、比较细胞冻存前和复苏后的存活率、绘制生长曲线。生长动力学的测定显示细胞生长正常,随着细胞传代增加细胞增殖速度有所下降,三代的倍增时间分别为F5：35.65h,F10：43.29h,F15：48.40h。在染色体核型分析部分,选取了不同代次的100个中期分裂细胞,其中88%以上均为二倍体细胞,已经大于建系正常二倍体占75-80%的要求,说明即使经过细胞的多次传代、冻存、复苏,本实验所建立的细胞系遗传特性是稳定的,这种培养体系下培养的北山羊成纤维细胞,可以用于生物工程或其他生物学领域的研究。其性染色体表明研究对象为一只雄性北山羊。在MEMAlpha、DMEM/F12、M199、DMEM高糖四种培养基的对比中,MEMAlpha相较其他培养基更适合北山羊肌肉组织成纤维细胞的体外培养。在血清浓度的选择上,12%的浓度应是最优浓度。本实验成功建立了北山羊肌肉组织成纤维细胞的体外培养体系,在细胞水平上保存了北山羊的遗传资源,为今后北山羊细胞或建立在细胞基础上的研究提供试验材料和基础数据。
【作者】王蓉蓉；
【导师】李煜；李瑶；
【作者基本信息】内蒙古大学，动物学，2014，硕士
【关键词】北山羊；成纤维细胞；体外细胞培养；生物学特性；

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