转fat-1基因牛外源基因整合位点鉴定

【摘要】临床医学研究表明,n-3多不饱和脂肪酸(n-3polyunsaturatedfattyacids,n-3PUFAs)对人类健康十分重要,而高水平的n-6多不饱和脂肪酸(n-6PUFAs)对人体是有害的,常与癌症、心脑血管疾病以及部分精神疾患的发生有关。因此,在日常饮食中,摄入的n-3和n-6PUFAs的比例维持在1：1是十分重要的。针对目前n-3PUFAs来源有限的状况,利用转基因家畜提供n-3PUFAs可能是一种有效的方法。在本研究中,将fat-1的蛋白质编码区序列按照哺乳动物密码子的偏好进行优化,构建表达载体,利用体细胞核移植技术生产fat-1转基因牛。本试验使用接头介导PCR法对转基因牛ZK002的fat-1侧翼序列进行分析,利用RealtimePCR技术检测了外源基因的拷贝数并检测整合位点周边基因的表达情况。此外,还分析并比较了该牛8种组织中的fat-1的表达情况,以及在肌肉、脂肪和肝脏3种组织中与脂肪合成代谢相关基因的表达情况。结果表明：fat-1基因插入到6号染色体上,拷贝数为2个,整合位点邻近基因的表达受到影响；在8种组织中fat-1均有表达,n-3PUFAs在37种脂肪酸所占比例提高,n-6/n-3PUFAs比值下降；在肌肉、脂肪和肝脏中与脂肪合成相关基因FANS和ACC的表达下调。本研究初步建立了利用LM-PCR确定转基因牛外源基因的整合位点的检测体系,为今后转基因动物的研究奠定基础。
【作者】于超然；
【导师】李光鹏；
【作者基本信息】内蒙古大学，动物学，2014，硕士
【关键词】侧翼序列；接头介导PCR；n-3多不饱和脂肪酸；n-6多不饱和脂肪酸；

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