紫外及甲基磺酸乙酯诱变选育竹红菌甲素高产菌株的研究

【摘要】竹黄菌（ShiraiabambusicolaP.Hennigs）是一种稀有的寄生性药用真菌，其子实体是传统的中药-竹黄资源，近期研究发现竹黄苝醌类有效成分-竹红菌素具有抗炎、抗菌、镇痛、局麻及抗肿瘤的作用，而且已成为抗菌和抗肿瘤的临床光疗药物。但由于野生竹黄采收期短、产量低，竹红菌素、竹黄多糖及其他活性成分的研究和生产都受到了极大的限制。为了综合开发利用竹黄菌，本文开展了竹黄菌的无性系培养，并通过物理（紫外线）和化学（甲基磺酸乙酯）处理技术，对竹黄菌开展诱变育种研究，以期选育得到遗传稳定的竹红菌甲素高产菌株，为竹黄菌的生物技术生产和竹红菌素药物资源的开发提供技术和参考，同时竹黄菌的生物技术培养也有利于对野生竹黄菌的资源保护。本研究首先开展了竹黄菌Shiraiasp.S8菌株培养、菌丝中竹红菌甲素的提取分离和竹黄菌的液体发酵培养，通过筛选和优化了竹黄菌产竹红菌素培养基碳源、氮源及不同培养时间、起始pH值及装液量条件，筛选出优化的培养基和发酵条件，培养基为马铃薯20%，葡萄糖2%，KH2PO40.3%，MgSO40.15%，维生素B10.001%，酵母膏0.5%。最佳发酵条件为：起始pH值为6.0，装液量200mL/500mL，并在培养10d后收获竹黄菌菌丝体。其次开展了竹黄菌Shiraiasp.S8菌株的原生质体形成条件的研究，探索出竹黄菌原生质体形成的最适条件：液体培养菌丝体菌龄50h，5mg/mL纤维素酶和10mg/mL蜗牛酶（终浓度）混合酶系，酶解时间2h，酶解温度30℃。在此条件下原生质体产量可以达到3.24×106个/mL，再生率可以达到3.5%。竹黄菌Shiraiasp.S8菌株原生质体经紫外线（距离15W紫外灯30cm处）照射处理0.5-2min，原生质体再生后经筛选得到一株竹红菌甲素高产诱变菌株C6，其遗传稳定性良好，产量与S8菌株相比提高53.7%，达到28.1mg/L。本研究以S8菌株为出发菌株，用0.5-2.5%甲基磺酸乙酯（EMS）处理竹黄菌悬浮孢子10-30min，结合平板色素圈大小初筛和高效液相色谱（HPLC）分析进行复筛，经诱变筛选得到高产菌株10-5，竹红菌甲素产量达到26.8mg/L，与原始出发菌株提高了46.4%，且经过连续传代5次，生长性状和竹红菌甲素产量稳定。
【作者】杨珠英；
【导师】王剑文；丁建忠；
【作者基本信息】苏州大学，微生物与生化药学（专业学位），2013，硕士
【关键词】竹黄菌；竹红菌素；紫外诱变；甲基磺酸乙酯；选育；

【参考文献】
[1]赵健.混合动力车用大功率永磁起动发电机研究[D].哈尔滨工业大学,电气工程及其自动化,2013,硕士.
[2]李杰.夏天无总生物碱微孔渗透泵片的研究[D].成都中医药大学,药剂学,2012,硕士.
[3]刘文晶.高催化活性的TiO_2/石墨烯复合材料的制备与性能研究[D].南京理工大学,2013.
[4]仲林红.磷灰石结构La_(9.33)Ge_6O_(26)电解质材料的熔盐法制备和表征[D].吉林大学,凝聚态物理,2014,硕士.
[5]孙伟伟.终极控制人特征、审计意见与高管变更[D].浙江工商大学,会计学,2014,硕士.
[6]裴涛.非法证据排除规则的理论与实务研究[D].暨南大学,法律,2013,硕士.
[7]谢春旭.国际税收协定中受益所有人概念探析[D].厦门大学,国际法学,2014,硕士.
[8]段进潮.菘蓝抗旱性研究[D].吉林农业大学,药用植物,2012,硕士.
[9]矫龙.一种柔性覆铜板用聚酰亚胺复合膜的制备及表征[D].吉林大学,有机化学,2014,硕士.
[10]付璇,鲍婕,黄时荣,王楠,袁志超,张燕,路秀真,叶丽蕾,刘建影.新型BN/Ag二维层状复合材料的导热胶的制备及其导热性能的表征[J].化工新型材料,2015,04:136-138+142.
[11]张仕凯.应用生物固定型假体对青年强直性脊柱炎髋关节病变行全髋置换[D].苏州大学,关节外科,2013,硕士.
[12]赵争鸣,雷一,贺凡波,鲁宗相,田琦.大容量并网光伏电站技术综述[J].电力系统自动化,2011,12:101-107.
[13]徐箭,施微,徐琪.含风电的电力系统动态频率响应快速评估方法[J].电力系统自动化,2015,10:22-27+111.
[14]李湛.电流模式流水线模数转换器采样保持与比较器电路的研究[D].湖南大学,信息与通信工程,2012,硕士.
[15]蒋吟.后现代主义设计美学在公共空间导向系统中色彩设计的研究[D].华东师范大学,美术学,2013,硕士.
[16]吴颖.基于员工满意度的公务员分类管理制度优化研究[D].上海交通大学,公共管理,2013,硕士.
[17]章敏.交往理论视阈下大学生人际交往抗挫折能力研究[D].上海大学,思想政治教育,2014,硕士.
[18]高鹏.测量托轮位置确定回转窑筒体中心线的研究[D].武汉理工大学,机械工程,2013,硕士.
[19]常欣.低温胁迫下茶树CsCBF1调控途径及其体外功能鉴定的初步研究[D].安徽农业大学,茶学,2012,硕士.
[20]柳莉.城镇女性非正规就业群体就业保障问题研究[D].安徽大学,行政管理,2013,硕士.
[21]叶杰.我国教育政策的管理、政治和法律价值分析[D].兰州大学,教育经济与管理,2013,硕士.
[22]张爽.近代日本对青岛渔业的侵略述论[D].曲阜师范大学,中国近现代史,2013,硕士.
[23]李昌彪,夏克文,宋建平,闾晓晨.一种基于属性重要性的粗糙RBF神经网络[J].控制与决策,2006,07:821-824+828.
[24]于伟程.印染丝光工艺废碱纳滤膜法回收中试研究[D].大连理工大学,环境工程（专业学位）,2013,硕士.
[25]李盈凯.IκBα-M基因诱导舌鳞癌Tca-8113凋亡的相关研究[D].山东大学,口腔颌面外科,2011,硕士.
[26]刘宝友,苏保河.特殊状态需要特殊修理的诊断可修系统[J].自动化学报,2002,01:97-102+119.
[27]潘彤.社会工作介入大学生逃课行为矫正[D].南京农业大学,社会工作,2013,硕士.
[28]刘昀.本科外国建筑史教材研究[D].南京大学,建筑历史与理论,2013,硕士.
[29]李岩.两个新的非线性方程族的可积性研究[D].郑州大学,基础数学,2013,硕士.
[30]杨学兵,蔡庆生.基于数据立方体的维内关联规则挖掘算法[J].北京科技大学学报,2003,01:83-86.
[31]任春霞.ODN对牙龈卟啉单胞菌侵入成骨细胞增殖活性的影响[D].吉林大学,口腔医学,2014,硕士.
[32]刘士俊.蚌埠市公路系统职工培训体系研究[D].安徽大学,MBA工商管理,2012,硕士.
[33]于晗,赵萍.日本公共文化服务的多元化供给及运营模式[J].新视野,2014,06:110-113.
[34]崔雪.引渡中的人权保护问题[D].黑龙江大学,法律,2013,硕士.
[35]朱妍.初中英语语法教学问题及对策研究[D].东北师范大学,课程与教学论,2012,硕士.
[36]李榕榕.新型F-18标记的脑部H_3受体蛋白前体化合物和标准物的合成[D].南京理工大学,材料学,2012,硕士.
[37]刘长庚.江汉油田软弱地基容许承载力的理论与实践[J].油田地面工程.1989(03)
[38]蔚海燕,裴成发.国外图书情报学研究分析[J].晋图学刊,2005,05:3-6+50.
[39]胡蕾.siRNA抑制HMGA1基因表达对LX-2细胞生物学功能的影响[D].南昌大学,内科学,2014,硕士.
[40]杨健.以六氟丙烯二聚体为基础的氟表面活性剂的合成及性能研究[D].陕西科技大学,化学,2013,硕士.
[41]苑博.自噬在紫杉醇诱导人卵巢癌顺铂耐药细胞死亡中的作用[D].吉林大学,临床医学,2013,硕士.
[42]张杰.试论中国知识产业经济[D].首都经济贸易大学,产业经济学,2004,硕士.
[43]高冬霞.旋转床超重力下多环境传质混合特性研究[D].北京化工大学,化学工程与技术,2013,硕士.
[44]李爱玲.纳米孔洞金属—有机骨架空心球的制备及其应用研究[D].安徽大学,高分子化学与物理,2013,硕士.
[45]谯礼.基于改进Sarma法的土质路堑边坡可靠度研究[D].西南交通大学,道路与铁道工程,2013,硕士.
[46]夏冬艳.巍山彝族服饰图案暨图形元素在平面设计中的应用研究[D].云南艺术学院,设计艺术学,2013,硕士.
[47]张富斌.智能入侵检测技术研究[D].西安电子科技大学,2004.
[48]朱美玲.DNA修复基因单核苷酸多态性和食管癌易感性及放疗后损伤和生存关系的研究[D].复旦大学,肿瘤学,2013,博士.
[49]王坤.2011年全国女足超级联赛北京女足比赛情况分析[D].河北师范大学,体育教学,2012,硕士.
[50]黄琳,段志生.控制科学中的复杂性[J].自动化学报,2003,05:748-754.