MiR-18a靶向Dicer1抑制肝癌细胞的侵袭迁移

【摘要】背景和目的微小RNA（microRNA，miRNA）是一类大小约22个核苷酸的保守非编码RNA，能够与下游靶基因mRNA的3’UTR碱基配对并引导基因沉默复合物（RNA-inducedsilencingcomplex，RISC）降解mRNA或抑制mRNA的翻译，参与生物合成和肿瘤的发展。肝细胞肝癌（hepatocellularcarcinoma，HCC）的发生、发展及转移是一个多步骤多因素参与的复杂过程。迄今为止，对肝细胞癌组织进行miRNA分子差异表达谱分析的研究也十分有限。目前已有研究表明miR-18a在肝癌组织的表达水平较癌旁正常组织高。我们前期研究结果显示肝癌患者血清中miR-18a水平较健康人高。本课题拟在此基础上进一步探讨miR-18a对肝癌细胞侵袭迁移的影响并阐明其作用机制。方法1、用脂质体介导的转染方法将miR-18a阻遏物（inhibitor），miR-18a阻遏物阴性对照组（inhibitornegativecontrol,inhibitorNC）分别转染肝癌细胞株HepG2及HepG2.2.15。通过transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力；采用transwell迁移实验及划痕实验检测细胞迁移能力。2、生物信息学方法预测Dicer1为miR-18a的靶基因。用脂质体介导的转染方法分别将靶向沉默Dicer的小干扰RNA（smallinterferingRNA,siRNA）与miR-18ainhibitor共转染肝癌细胞株HepG2及HepG2.2.15，并设置DicersiRNA的阴性对照（negativecontrolsiRNA，siRNANC）与miR-18ainhibitor共转染为对照组，以及miR-18ainhibitor组、inhibitorNC对照组，transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力，transwell迁移实验及划痕实验检测细胞迁移能力，westemblot检测Dicerl蛋白表达，观察miR-18a对肝癌细胞侵袭、迁移的影响是否通过抑制Dicer1表达发挥。结果1、Transwell侵袭及迁移实验结果显示：与对照组比较，转染miR-18ainhibitor72h后，HepG2及HepG2.2.15细胞侵袭和迁移能力均显著降低，平均每高倍视野（×200）侵出小室的细胞数与NC组相比均显著减少，HepG2细胞miR-18ainhibitor组分别为NC组的0.410倍、0.446倍（P<0.01）；HepG2.2.15细胞miR-18ainhibitor组分别为NC组的0.565倍、0.602倍（P<0.01）。划痕实验显示HepG2及HepG2.2.15细胞划痕后24h、48h、72h，miR-18ainhibitor组划痕愈合速度明显慢于NC组（均P<0.05）。2、Westernblot检测及transwell侵袭及迁移实验结果显示：与转染inhibitorNC组相比，转染miR-18ainhibitor组48h后细胞中Dicer1蛋白表达水平显著升高（P<0.01），transwell显示细胞侵袭和迁移能力均显著减弱，平均每高倍视野（×200）侵出小室的细胞数与NC组相比均显著减少，HepG2细胞miR-18ainhibitor组分别为NC组的0.462倍、0.460倍（P<0.01）；HepG2.2.15细胞miR-18ainhibitor组分别为NC组的0.574倍、0.579倍（P<0.01）。与共转染siRNANC+miR-18ainhibitor组相比，共转染DicersiRNA+miR-18ainhibitor48h后细胞中Dicer1蛋白表达水平显著降低（P<0.01），同时transwell显示细胞侵袭和迁移能力均显著增强，平均每高倍视野（×200）侵出小室的细胞数与siRNA-NC+miR-18ainhibitor组相比均显著增多，HepG2细胞DicersiRNA+miR-18ainhibitor组分别为siRNA-NC+miR-18ainhibitor组的2.079倍、2.193倍（P<0.01）；HepG2.2.15细胞DicersiRNA+miR-18ainhibitor组分别为siRNA-NC+miR-18ainhibitor组的1.619倍、1.777倍（P<0.01）。划痕实验显示HepG2及HepG2.2.15细胞划痕后24h、48h、72h，共转染DicersiRNA+miR-18ainhibitor组划痕愈合速度明显快于siRNANC+miR-18ainhibitor组（均P<0.05）。证明了miR-18a通过负向调控Dicerl的表达影响肝癌细胞的侵袭、迁移能力。结论1、MiR-18a促进肝癌细胞的侵袭、迁移。2、MiR-18a促进肝癌细胞的侵袭、迁移的作用通过靶向抑制Dicer1表达而发挥。
【作者】余波；
【导师】李莉华；
【作者基本信息】苏州大学，肿瘤学，2014，硕士
【关键词】肝癌；miR-18a；Dicer1；侵袭；迁移；

【参考文献】
[1]郑光润.列控系统车载人机界面识别技术研究与实现[D].北京交通大学,2014.
[2]魏文武.从执行到决策——政府管制政策分析[D].上海师范大学,行政管理,2004,硕士.
[3]杨欣璐.电影《肖申克的救赎》的多模态话语分析[D].兰州理工大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[4]汪彬彬.中空SnO_2纳米纤维的掺杂、修饰及其气敏特性[D].浙江大学,材料科学与工程,2014,硕士.
[5]韩斌.中国梅山文化生态园建筑设计中神秘性文化意境的表达[D].湖南大学,建筑学,2012,硕士.
[6]李海涛.农村居民就医行为及其模型研究[D].南京农业大学,社会学,2012,硕士.
[7]崔燕.沙质荒漠化过程中土壤有机碳变化特征[D].中国农业大学,土壤学,2004,硕士.
[8]冷培.湖南省承接服务外包影响因素与发展策略研究[D].湘潭大学,国际贸易学,2012,硕士.
[9]陈远,罗琳,沈祥兴.信息系统中的数据质量问题研究[J].中国图书馆学报.2004(01)
[10]岳姿洁.口腔干预对SD大鼠颈动脉影响的病理学研究[D].山西医科大学,口腔临床医学,2013,硕士.
[11]李会.手机杂志的版式设计研究[D].河北师范大学,学科教学,2012,硕士.
[12]冯冬芹,沈佳骏,褚健.基于有色Petri网的时钟同步协议安全性分析[J].控制与决策,2014,12:2144-2150.
[13]沙美华.用于激光扫描的语音控制系统的研究与开发[D].天津大学,机械制造及其自动化,2004,硕士.
[14]郑杰良.GPS位置算法关键技术的研究与工程实现[D].河北科技大学,电子与通信工程,2014,硕士.
[15]牛永防.新疆南疆高校大学生思想政治教育研究[D].喀什师范学院,思想政治教育,2014,硕士.
[16]杜立奎.基于DEA的物流产业效率研究[D].江南大学,管理科学与工程,2013,硕士.
[17]侯爱波.钢筋混凝土框架—剪力墙结构平面非线性地震反应分析[D].湖南大学,结构工程,2003,硕士.
[18]高凌华.WTO保障措施制度与我国保障措施的法律实践及其完善[D].华东政法学院,法律,2003,硕士.
[19]王好好.A Study on Foreignization Strategy of Translating “龙” as a Culture-gapped Word from the Perspective of Intercultural Communication[D].西安外国语大学,翻译,2014,硕士.
[20]何斐.Y掺杂下α-Al_2O_3涂层的低温等离子复合渗法制备与性能研究[D].南京航空航天大学,材料加工工程,2013,硕士.
[21]汪晟.中国英语学习者写作中话语标记语But使用特点的语料库研究[D].安徽大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[22]莫非.腹腔高压对肝脏氧化还原状态和组织病理变化的影响[D].广西医科大学,急诊医学,2013,硕士.
[23]李明军,马保离.非完整移动机器人的连续时变鲁棒K指数镇定[J].控制与决策,2011,11:1706-1710.
[24]张珍仙.非对称结构双子型两性离子表面活性剂的研究[D].上海大学,化学工艺,2012,硕士.
[25]李颖新,敬石开,李向前,占红飞,周竞涛,杨海成.云制造环境下基于用户行为感知的个性化知识服务技术[J].计算机集成制造系统.
[26]刘海涛.基于神经网络的多元化企业IT协同能力对绩效的影响研究[D].广东工业大学,企业管理,2014,硕士.
[27]武丽莉.高校科技创新平台推动地方经济发展的作用分析[D].太原科技大学,科学技术哲学,2014,硕士.
[28]本报记者宦建新通讯员陈梓军王虎羽.宁波新思路：新常态下发挥科技强有力支撑[N].科技日报,2015-06-12009.
[29]杨海燕.基于RFID技术与Android移动终端的应用研究[D].华侨大学,计算机技术（专业学位）,2013,硕士.
[30]黄文蝶.索尔·贝娄《雨王汉德森》异化主题研究[D].四川外国语大学,英语语言文学,2013,硕士.
[31]李猛.无纸记录仪验证平台引导加载程序的设计与实现[D].华东理工大学,控制工程,2013,硕士.
[32]宁龙梅.武汉市湿地功能评价与景观格局动态变化研究[D].中国科学院研究生院（测量与地球物理研究所）,自然地理学,2004,硕士.
[33]刘玉燕.氧化镓光催化降解邻苯二甲酸二甲酯（DMP）及动力学研究[D].青岛理工大学,建筑与土木工程,2013,硕士.
[34]嵇晓,王洪水,鲍玉斌,于戈.数据仓库技术在宝钢的实践[A].中国计算机学会数据库专业委员会.第十九届全国数据库学术会议论文集（技术报告篇）[C].中国计算机学会数据库专业委员会:,2002:4.
[35]张燕舞.我国肿瘤基因治疗的专利分析及相应发展对策研究[D].中南大学,2003.
[36]张思思.试析圣桑钢琴协奏曲的创作风格和特点[D].西安音乐学院,钢琴教学与演奏,2013,硕士.
[37]陈曦.Hilbert-Huang变换算法研究及其在纸机轴承故障诊断中的应用[D].陕西科技大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[38]宋小芳.中国金属学会自动化学术委员会冶金仪器仪表学术交流会在沪召开[J].冶金自动化,1981,01:64-65.
[39]金亚楠.老年患者经鼻蝶入路垂体瘤切除术中应用控制性降压对术后早期认知功能的影响[D].山东大学,临床医学（专业学位）,2013,硕士.
[40]朱羚.一种基于约束规则的访问控制模型的研究与实现[D].华东师范大学,计算机软件与理论,2004,硕士.
[41]杨智军.我国独立学院转设研究[D].西南大学,高等教育学,2013,硕士.
[42]周厚成.草莓果实成熟软化相关基因的研究[D].西北农林科技大学,生物化学与分子生物学,2014,博士.
[43]李晶晶.局部遮挡物体的轮廓修复算法研究[D].南昌航空大学,控制工程（专业学位）,2014,硕士.
[44]胡佩.XPG基因遗传变异与上皮性卵巢癌患者的铂类化疗[D].河北医科大学,妇产科学,2014,硕士.
[45]冯连勇,黎莉,裴勇.胜利油田岩性油藏勘探中的地震技术[J].石油地球物理勘探,2006,02:211-215+248+18-19.
[46]余佳音.江浙沪交汇处田山歌调查研究[D].上海大学,音乐学,2013,硕士.
[47]罗宾（RobinGhosh）.电动交通在中国的现状和未来[D].浙江大学,中国学,2012,硕士.
[48]张小雪.金属—空气电池阴极催化剂制备及性能研究[D].北京理工大学,2015.
[49]段妍.“做中学”在高职英语精读课堂中的应用[D].西安工业大学,外国语言学及应用语言学,2014,硕士.
[50]童佳节.初中英语教学的“支架”使用现状调查与分析[D].西南大学,外国语言学及应用语言学,2014,硕士.