RNA恒温扩增实时检测技术鉴定常见致病非结核分枝杆菌研究

【摘要】目的：以分枝杆菌常用的分子菌种鉴定靶标设计引物及探针，建立7种常见致病非结核分枝杆菌（NTM）的RNA恒温扩增实时快速检测方法（SAT），评价其体系的灵敏度及特异度；同时采用该鉴定体系初步评估其检测临床分离株和痰标本的应用效果。方法：分别以鸟、胞内、偶发、蟾蜍、瘰疬分枝杆菌的16SrRNA特异序列，堪萨斯、海分枝杆菌的23SrRNA特异序列为靶标设计各自的RNA探针和带有T7启动子的逆转录扩增引物，42℃恒温扩增实时检测7种常见致病NTM。SAT对22种分枝杆菌标准株、5种非分枝杆菌和259株分枝杆菌临床分离株进行鉴别检测，同时以PCR测序结果为参考对照，分析SAT与PCR测序法检测临床分离株中7种NTM的符合率。SAT和罗氏培养+PCR测序法同时对369份痰标本进行检测，两种检测方法结果不符的样本，重复SAT检测和罗氏培养，分析SAT与罗氏培养+PCR测序检测痰标本中7种NTM的符合率。结果：SAT能够将鸟、胞内、堪萨斯、偶发、蟾蜍、瘰疬分枝杆菌从22种分枝杆菌和5种非分枝杆菌中鉴定出来，特异度为100%；在鉴定海分枝杆菌时，瘰疬分枝杆菌有弱阳性，阳性样本需再进行瘰疬分枝杆菌检测以排除假阳性。SAT检测其灵敏度分别30CFU/ml、20CFU/ml、30CFU/ml、60CFU/ml、20CFU/ml、240CFU/ml、110CFU/ml。以PCR测序法为参考方法，检测临床分离株中鸟、胞内、堪萨斯、偶发、蟾蜍、瘰疬、海分枝杆菌的符合率分别为100%（259/259）、100%（259/259）、99.61%（258/259）、99.61%（258/259）、100%（259/259）、100%（259/259）、98.07%（254/259）。以罗氏培养+PCR测序为参考方法，检测痰标本中鸟分枝杆菌的符合率为100%（369/369），胞内分枝杆菌的符合率为99.19%（366/369），堪萨斯分枝杆菌的符合率为99.73%（368/369），偶发、蟾蜍、瘰疬、海分枝杆菌的符合率均为100%（369/369）。结论：SAT鉴定检测鸟、胞内、堪萨斯、偶发、蟾蜍、瘰疬、海分枝杆菌具有较高的灵敏度和特异度，可为7种常见致病NTM快速鉴定提供一种新方法。
【作者】李园园；
【导师】胡忠义；崔振玲；
【作者基本信息】苏州大学，微生物学，2014，硕士
【关键词】RNA恒温扩增；鸟分枝杆菌；胞内分枝杆菌；堪萨斯分枝杆菌；偶发分枝杆菌；蟾蜍分枝杆菌；瘰疬分枝杆菌；海分枝杆菌；分离株；痰标本；PCR；鉴定；

【参考文献】
[1]尹戎.妨碍刑事司法公正行为的刑法规制问题探讨[D].贵州民族大学,刑法学,2012,硕士.
[2]王亿绵.《大英百科年鉴1994·中亚与南亚》翻译实践报告[D].郑州大学,翻译（专业学位）,2013,硕士.
[3]白豪.武者小路实笃初期作品中的自我意识[D].吉林大学,外国语言学及应用语言学,2014,硕士.
[4]欧爱明.杜仲叶粉对鸡肉用性能影响的研究[D].湖南农业大学,养殖,2003,硕士.
[5]汪礼亮.作为业界“游戏”的中国新闻奖论文评选[D].安徽大学,新闻学,2014,硕士.
[6]罗继杰.军事公共建筑更节能[J].中国建设信息(供热制冷专刊).2005(07)
[7]王厚福.吉辽两省城市化进程对城乡收入差距影响的比较研究[D].吉林大学,数量经济学,2013,硕士.
[8]李盼.融入直方图相交核的局部稀疏编码图像分类算法研究[D].哈尔滨工业大学,计算机科学与技术,2014,硕士.
[9]刘然,孙建忠,罗亚琴,孙伟.基于环形耦合策略的多电机同步控制研究[J].控制与决策,2011,06:957-960.
[10]邱静波.RFID读写技术在户外广告互动中的应用[D].上海交通大学,计算机工程,2013,硕士.
[11]杜文俊,刘雪松,陶玲艳,金叶,陈勇,吴莎,吴建雄,毕宇安,萧伟.热毒宁注射液金银花和青蒿(金青)醇沉过程中多指标的近红外快速检测[J].中草药,2015,01:61-66.
[12]孙书利,邓自立.Wiener状态滤波器设计新方法[J].控制与决策,2002,04:503-505.
[13]程清.《功夫熊猫2》中熊猫形象的重塑与融合[D].湖北工业大学,外国语言学及应用语言学,2014,硕士.
[14]王颖.我国失业保险制度的评估与发展完善[D].辽宁医学院,马克思主义基本原理,2012,硕士.
[15]杜涛.氧化石墨烯水泥基复合材料性能研究[D].哈尔滨工业大学,2014.
[16]高越俊.硬目标侵彻引信性能检测用测试系统设计[D].南京理工大学,机械电子工程,2013,硕士.
[17]叶荣华.面向服务的Agent协商机制研究[D].浙江大学,计算机应用技术,2004,硕士.
[18]罗达灿.自适应鲁棒滤波算法研究及其在发酵过程中的应用[D].北京化工大学,控制科学与工程,2013,硕士.
[19]陆芳.CFP-10和ESAT-6检测对结核性脑、胸膜炎早期诊断意义的研究[D].宁波大学,内科学,2013,硕士.
[20]李少光.离心式热油泵的水力设计及数值模拟[D].东北大学,机械电子工程,2010,硕士.
[21]尹国桃.中日文学作品中“移就”修辞现象的对比研究[D].南京农业大学,日语语言文学,2012,硕士.
[22]薛禹胜.电力市场稳定性与电力系统稳定性的相互影响[J].电力系统自动化,2002,21:1-6+33.
[23]彭涛.基于SCADE的信息物理融合系统的分析和设计方法[D].广东工业大学,计算机技术,2014,硕士.
[24]乔会.地震叠前时间偏移处理方法应用研究[D].长安大学,地球探测与信息技术,2014,硕士.
[25]陈颖燕.票据签章法律问题研究[D].华侨大学,民商法学,2013,硕士.
[26]马曦.钾长石综合利用制备缓释钾肥的实验研究[D].中国地质大学（北京）,岩石矿物材料学,2013,硕士.
[27]尤丹,王寿光,周孟初.信标可控性定义及问题[J].自动化学报,2014,12:2687-2696.
[28]NESSUNYEIVANMAXIME（尹万）.基于波特五力模型的喀麦隆MTN公司战略分析[D].华中师范大学,工商管理,2013,硕士.
[29]李廷友.控制机“模入”通道的共模抑制及其方案选择[J].冶金自动化,1981,03:23-29.
[30]薛武红.氧化锌和氧化钒薄膜基的电致阻变性能及机理研究[D].山西师范大学,原子与分子物理,2014,硕士.
[31]纪煦.飞秒激光诱导硅表面微纳结构几何形貌调控实验研究[D].北京理工大学,2015.
[32]白洋铭.农村土地流转限制问题研究[D].中国政法大学,比较法学,2013,硕士.
[33]陈敏.实时超声造影技术与病理对照评价肝纤维化分期的实验研究[D].山西医科大学,影像医学与核医学,2013,硕士.
[34]王峥燕.高新技术集群企业网络嵌入对技术创新的影响研究[D].浙江工业大学,企业管理,2012,硕士.
[35]鲁勖琳.基于氮化钛的离子选择电极的研制[D].湖南大学,分析化学,2003,硕士.
[36]菅桂星.金属改性HZSM-5分子筛催化甲醇制烯烃的研究[D].北京交通大学,化学工程（专业学位）,2013,硕士.
[37]王静怡.高强高导Cu-Cr-Zr合金的热变形行为研究[D].西安建筑科技大学,材料加工工程,2013,硕士.
[38]韩亚婷.网络语言之模因论解读[D].上海大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[39]刘东兴.我国场外交易市场发展模式研究[D].首都经济贸易大学,金融学,2013,硕士.
[40]田鹤城.论民事抗诉制度[D].中国政法大学,法律,2004,硕士.
[41]张晓林.石墨烯基复合材料的制备及吸波性能[D].哈尔滨工业大学,2011.
[42]施建平.《型世言》代词研究[D].苏州大学,汉语言文字学,2003,硕士.
[43]唐晨野.男性尿道狭窄手术前后性功能状况及相关影响因素研究[D].苏州大学,外科学（专业学位）,2013,硕士.
[44]陈锋.SZGB公司薪酬体系优化设计[D].厦门大学,工商管理,2014,硕士.
[45]房磊.基于铝栅工艺的CMOS高温运算放大器的研究与设计[D].兰州交通大学,2014.
[46]胡栋栋.基于系统观的航空遇险应急救援系统研究[D].中国民用航空飞行学院,载运工具运用工程,2013,硕士.
[47]陈德武.H.264帧内预测快速模式选择算法的研究[D].兰州大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[48]陆明月.基于PDCA循环的煤矿内部控制体系研究[D].石家庄经济学院,会计学,2013,硕士.
[49]张晓波.情绪及其调节方式对足球运动员决策的影响[D].北京体育大学,应用心理学,2013,硕士.
[50]朱哲.石墨烯表面化学研究取得新进展[J].科学,2012,03:55.