基于腺病毒载体的新型流感疫苗研究及人群中腺病毒、肠病毒的血清流行病学调查

【摘要】流感病毒是引起流行性感冒的主要病原体。血凝素是流感病毒表面免疫原性最强的抗原成分，刺激机体产生保护性中和抗体，因此血凝素作为免疫原被应用于新型通用型流感疫苗的研究。重组腺病毒作为一种重要的基因表达载体，具有高表达、可同时诱导特异性体液免疫和细胞免疫、安全性好、易于制备等优点。人5型腺病毒(humanadenovirustype5，AdHu5）曾被广泛应用于各种疫苗研究，但人群中普遍存在AdHu5的预存中和抗体，使AdHu5作为疫苗载体的临床应用受限。为克服预存中和抗体的影响，稀有人血清型或来自于其它种属的腺病毒被发展为新型疫苗载体。源于黑猩猩的腺病毒在人群中的血清阳性率较低，免疫原性强，被证明是一种理想的疫苗载体。本研究中我们以腺病毒黑猩猩血清型68（chimpanzeeadenovirustype68，AdC68）载体为平台，将多种不同亚型的流感病毒HA基因克隆至该腺病毒载体，构建成表达不同HA的重组腺病毒库，以此作为新型流感疫苗，并研究其免疫反应及免疫保护效果。通过分子克隆手段，我们将H1N1、H2N2、H3N2、H4N2、H5N1、H6N6、H7N2、H9N2及H7N9等流感病毒的HA基因分别克隆至AdC68载体，并获得相应的重组腺病毒。表达H7N9HA的重组腺病毒免疫小鼠后显示，该疫苗成功诱导小鼠产生血凝抑制抗体和针对H7N9HA的特异性抗体；分型抗体检测显示可诱导高滴度的IgG2b。因此基于重组腺病毒载体的流感疫苗可刺激小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫。近年来，手足口病（Hand,footandmouthdisease，HFMD）成为严重的公共卫生问题。肠病毒71（Enterovirus71，EV71）和柯萨奇病毒16(Coxsackievirus16，CA16)是引起手足口病的主要病原体。这两种病毒主要感染7岁以下儿童，但也有成人感染而致病。另外，在有些地方腺病毒和肠病毒共感染成为手足口病另一致病因素。因此，我们调查中国健康成人血清中针对肠病毒和腺病毒的中和抗体的流行情况，以探讨这些病毒的流行趋势以及人群的免疫力。我们共收集了391份健康成人血清，通过微量中和试验检测血清中针对EV71、CA16、人腺病毒5型（adenovirushumanserotype5，AdHu5）和黑猩猩腺病毒7型（chimpanzeeadenoviruspan7，AdC7）病毒的中和抗体滴度。结果显示EV71、CA16、AdHu5三种病毒在人群中的阳性率较高，分别为85.7%、58.8%和74.2%。三种病毒都为阳性的血清阳性率为39.4%（154/391），其中各病毒中和抗体滴度的中位数分别为：80、40和640。分析发现EV71中和抗体效价与CA16、AdHu5有一定的相关性。AdC7在人群中的血清阳性率较低，为11.8%。由于人群中针对AdC7的预存免疫较低，提示AdC7可以作为一种理想的疫苗载体。
【作者】王祥；
【导师】熊思东；周东明；
【作者基本信息】苏州大学，免疫学，2014，硕士
【关键词】流感病毒；腺病毒载体；疫苗；血凝素；免疫反应；手足口病；血清阳性率；中和抗体；EV71；CA16；AdHu5；AdC7；

【参考文献】
[1]于锦程.情境式单元复习课教学设计的研究[D].首都师范大学,学科教学,2014,硕士.
[2]王京,李金义.基于WinCC的恒温水槽系统设计[J].实验技术与管理,2015,03:88-92.
[3]王智华.高中数学校本课程开发研究[D].内蒙古师范大学,学科教学（专业学位）,2012,硕士.
[4]曹付剑.《诗垦地》研究[D].西南大学,中国现当代文学,2014,硕士.
[5]杨敏科.灰色金融及其疏导[D].天津大学,2004.
[6]刘成程.利用ELISA与荧光定量PCR技术筛查新生儿巨细胞病毒感染水平及探讨与肝脏损害的相关性[D].青岛大学,病原生物学,2013,硕士.
[7]曹世豪.钢轨表面疲劳裂纹的扩展与预防研究[D].西南交通大学,工程力学,2014,硕士.
[8]胡煜熙.管理层权力与高管薪酬的实证研究[D].江西财经大学,会计学,2013,硕士.
[9]高文坚.高中政治学科研究性学习中问题意识的培养[D].福建师范大学,教育,2003,硕士.
[10]朱泽坤.江苏省商业银行联合管理集团企业授信风险研究[D].安徽大学,工商管理,2014,硕士.
[11]高桂蓉.保险代位求偿权问题研究[D].河北大学,法律,2014,硕士.
[12]张军英,许进,保铮.稳健二进神经网络及其基本性质研究[J].自动化学报,2001,05:657-664.
[13]高凌云.糖中提取3D石墨烯[J].现代物理知识,2014,03:51.
[14]陈圆.“微时代”语境下的系列微电影的价值取向探究[D].首都师范大学,影视文学,2013,硕士.
[15]周卫.带式焙烧机生产过程中预热焙烧优化控制[J].冶金自动化,2014,03:72-75.
[16]田果.萨拉萨蒂创作演秦的风格特征及其文化分析[D].河南大学,音乐学,2004,硕士.
[17]温贺.大连城市地域空间结构实证研究[D].辽宁师范大学,人文地理,2003,硕士.
[18]刘刚凌.文化创意产业对视觉传达设计教学改革的影响[J].电子制作,2015,16:183.
[19]张华桁.工作流关键技术研究及轻量级引擎构件建构[D].东华大学,电力电子与电力传动,2004,硕士.
[20]韩发军.十六大以来党的民生思想与实践研究[D].齐鲁工业大学,马克思主义中国化研究,2014,硕士.
[21]张雪.硼替佐米在肺动脉高压大鼠模型中的实验性及机制性研究[D].山东大学,儿科学,2013,硕士.
[22]刘竞雄（LiuChing-Hsiung）.急性缺血性脑中风的针刺疗效评估：一随机、对照研究[D].广州中医药大学,针灸推拿学,2014,博士.
[23]张永安,李晨光.创新网络结构对创新资源利用率的影响研究[J].科学学与科学技术管理,2010,01:81-89.
[24]孙承鉴.电子图书馆的雏形[J].中国电子出版.1996(01)
[25]杨康.基于有限元与空气动力学的弓网接触压力仿真分析[D].西南交通大学,电力系统及其自动化,2014,硕士.
[26]黄凡,王登红,陈毓川,王成辉,唐菊兴,陈郑辉,王立强,刘善宝,李建康,张长青,应立娟,王永磊,李立兴,李超.中国内生钼矿床辉钼矿的微量元素特征研究[J].矿床地质,2014,06:1193-1212.
[27]薛月.郑州市初三年级学生体育锻炼问题研究[D].首都体育学院,体育教育学,2013,硕士.
[28]吴丹.井下瓦斯智能无线监控系统的设计[D].哈尔滨理工大学,测试计量技术与仪器,2012,硕士.
[29]徐平.论蒋韵长篇小说的儿童叙述与儿童形象[D].山西师范大学,中国现当代文学,2014,硕士.
[30]吴亚丽.关于向量值Hardy空间和向量值Dirichlet空间的Beurling型定理[D].苏州大学,基础数学,2014,硕士.
[31]潘建伍.碳纤维抗弯加固钢筋混凝土梁的剥离破坏研究[D].东南大学,2005.
[32]王一蕾,林世平.基于Web页面链接结构的挖掘算法[J].福州大学学报(自然科学版),2004,04:476-478.
[33]谭天义.低分子量马来酸酐化聚丁二烯橡胶改性聚丙烯的制备及其对尼龙6的增韧[D].湖北大学,材料加工工程,2012,硕士.
[34]雷攀.定量发油系统优化控制的研究[D].西安工业大学,控制理论与控制工程,2014,硕士.
[35]覃子建.乌江渡电站水库地震灾害[J].地震学刊.1994(03)
[36]邓玲娟.氧化石墨的制备与表征[J].实验室科学,2015,01:30-32+36.
[37]吴新超.美国广播公司人物专访新闻稿翻译实践报告[D].河北师范大学,翻译,2014,硕士.
[38]石红.房屋管理信息系统建设总体规划的思路[J].科技情报开发与经济,2003,05:190-191.
[39]郝斌.江丰《平型关连续画》研究[D].中央美术学院,美术学,2013,硕士.
[40]王晓芳.困境与选择：新疆体育非营利组织市场化运行机制研究[D].山东大学,体育管理科学,2014,博士.
[41]程睿.细碎型青贮饲料高密度打捆机的设计与试验[D].吉林大学,农业工程,2014,硕士.
[42]彭醴纹.浅谈醴陵陶瓷包装的重要性及改革建议[J].艺术科技,2013,09:197.
[43]石运芝.雌性济宁青山羊生后性发育特性与雌孕激素及其受体关系的研究[D].山东农业大学,基础兽医学,2014,博士.
[44]蒋志惠.硒蛋白W对鸡肝脏细胞凋亡影响的研究[D].东北农业大学,临床兽医学,2013,硕士.
[45]张宝聚.网球“彩色区域”训练法的实验研究[D].山东体育学院,体育教学,2012,硕士.
[46]庄志坚.油管螺纹损伤评定系统研究[D].东北大学,机械设计及理论,2010,硕士.
[47]李宝洋.基于I-DEAS的星载可展开天线整机参数化建模研究[D].西安电子科技大学,机械电子工程,2012,硕士.
[48]阮婷.论马思聪作品中的现代性与民族性[D].中国艺术研究院,音乐学,2014,硕士.
[49]张歆皓.微波辅助水热条件下形貌可控二氧化锰的合成及其电化学性质的研究[D].吉林大学,2013.
[50]王聿明.替呋液局部应用治疗口腔内感染的临床研究[D].青岛大学,口腔临床医学,2003,硕士.