溴硝醇的致突变致畸及长期毒性研究

【摘要】目的：观察溴硝醇单次给予和反复给予SD大鼠90天后动物的毒性反应、毒性靶器官和可能的延迟毒性，观察溴硝醇的致突变致畸作用，对杀菌剂溴硝醇的暴露危害进行评估。方法：90天经口染毒试验选择100只体重在120-150g的SD大鼠，随机分为4组，每组20只（雌雄各半），对照和高剂量组额外再分别添加10只（雌雄各半）动物作为恢复期和可能的中期检查用。每天给药1次，连续给药90天。剂量分别为每天0、20、40、及80mg/kg。试验期间观察指标包括死亡率，临床表现，体重，摄食量评价，染毒结束后每组试验存活大鼠被安乐死，采集的脏器用于组织病理学检查，采集血液和膀胱尿液进行血常规、凝血功能、血液生化、尿常规等指标检测，所有存活的动物进行解剖，对照组和高剂量组采集的脏器进行组织病理学检查。14天恢复期结束后，恢复组存活的大鼠被安乐死并解剖，进行各生理指标检测。细胞染色体畸变试验，选用CHL细胞，设暴露浓度为30、10、5、2.5mg/L(-S9)和50、40、20、10、3mg/L（+S9）。正向基因突变试验，选用CHO细胞，设暴露浓度为20、10、5和2.5mg/L。Ames试验选用TA97，TA98，TA100，TA102和TA1535菌株，暴露浓度为50、25、12.5、6.25和3.125μg/皿（+S9），30、15、7.5、3.75和1.875μg/皿（-S9）。小鼠骨髓微核试验，选择60只小鼠随机分成六组，每组10只，雌雄各半，雄性小鼠染毒剂量为20、40、80mg/kg；雌性小鼠染毒剂量为25、50、100mg/kg。大鼠致畸试验，共100只已交配雌鼠随机分成5组，每组20只。以纯化水为溶媒配制溴硝醇溶液。对照组经口灌胃给予溶媒，染毒组经口灌胃给予1.75、17.5、35和70mg/kg的溴硝醇溶液。染毒于妊娠6-17天进行，每天1次。对动物每天进行存活率观察和临床症状观察，测定妊娠0、3、7、10、13、16和20天体重，测定妊娠0-3、3-7、7-10、10-13、13-16及16-20天的摄食量。所有主实验动物于妊娠21天进行解剖和大体检查。检查卵巢和子宫，确定窝参数。所有存活胎仔进行称重及外观检查，测定冠臀长及性别。每窝大约1/2活胚胎放入改良后的Davidson’s固定液中进行固定，用于内脏检查。剩余活胎仔用茜素红溶液染色，用于骨骼检查。结果：在90天经口染毒实验过程中，高剂量组有8只动物死于毒性反应，毒性反应包括行动减缓，腹胀，体重减少（雄性动物），摄食量减少（雄性高剂量动物），白细胞增高（雄性高剂量动物），血糖偏高（中剂量和高剂量雄性动物），呼吸急促，眼睑下垂等。组织病理学检查未发现靶器官，但是中期死亡的动物大体解剖显示高剂量溴硝醇溶液有严重的胃肠道刺激作用。CHL细胞染色体畸变试验，各剂量组溴硝醇诱发的染色体畸变率均低于4.5%，与阴性对照组比较p＞0.05，差别无统计学意义。正向基因突变试验，各剂量组溴硝醇对CHO细胞突变频率与阴性对照比较P>0.05，差别无统计学意义。Ames试验，各剂量组溴硝醇的回变菌落数均小于阴性对照组的自发回变菌落数的2倍，亦无剂量反应关系。小鼠骨髓微核试验，溴硝醇三个剂量组微核出现率和对照组比较P>0.05，未引起微核出现率增加。致畸试验，实验过程中高剂量和中剂量组动物观察到了受试物相关的毒性反应，包括行动减缓，呼吸困难，眼睑下垂等，高剂量组观察到的有毒性反应症状要比中剂量多，同时高剂量组较对照组比，摄食量有所降低15%，体重、大体解剖检查、窝仔参数、胎仔性别、胎仔体长、胎仔体重、胎仔外观、内脏变化未观察到明显异常。高剂量组骨化不完全较对照组比有明显的高发生率，这是由于胎仔发育环境的改变引起的，高剂量组有两窝胎仔有明显的骨骼畸变。结论：溴硝醇溶液对大鼠每天经口染毒90天的LOAEL（出现副反应的最小剂量）是40mg/kg/day，NOAEL（不出现副反应的剂量水平）是20mg/kg/day,未发现靶器官。溴硝醇无明显致畸致突变作用，对大鼠的母体及胚胎-胎仔发育的无不良反应剂量（NOAEL）为35mg/kg/day。
【作者】陶继来；
【导师】李建祥；
【作者基本信息】苏州大学，公共卫生（专业学位），2014，硕士
【关键词】溴硝醇；致突变致畸；毒性；大鼠；

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