基于替米沙坦抗神经源性炎症的候选化合物Tek-1的药理学研究

【摘要】目的：基于血管紧张素ⅡⅠ型（AT1）受体和过氧化物酶增殖激活物受体γ（PPARγ）在抗氧化应激和神经保护中的重要作用，我们选择性修饰替米沙坦分子中联苯羧酸结构单元，获得新结构的候选化合物Tek-1。本论文采用分子药理学实验技术证明Tek-1同时为AT1受体阻断剂和PPARγ激动剂，具有双重靶点的受体药理学特性；体内评价Tek-1对β-淀粉样蛋白（β-amyloid,Aβ）诱导的小鼠学习记忆能力的影响，并对Tek-1参与神经炎症反应的小胶质细胞功能的调节作用及其分子信号转导机制进行研究，以期发现更优的PPARγ激动活性的AT1受体拮抗剂。方法：首先采用放射性受体配体结合实验、细胞内钙离子流动检测实验及报告基因检测系统评价Tek-1对AT1受体的亲和力、拮抗活性及对PPARγ的激动活性；其次在C57BL/6J小鼠侧脑室注射寡聚态Aβ1-42建立的模拟阿尔茨海默病（Alzheimer’sdisease，AD）病理改变的小鼠模型上，连续给予替米沙坦（1、3mg/kg）和Tek-1（1、3、10mg/kg）4周，采用Morris水迷宫及新物体识别实验观察替米沙坦和Tek-1对AD样模型小鼠空间及非空间学习记忆能力的影响，并采用ELISA的方法检测脑内白介素-6（IL-6）和单核细胞趋化因子（MCP-1）的含量；最后，建立细菌脂多糖（LPS）诱导的BV-2小鼠小胶质细胞炎症模型，采用0.1-10μM的替米沙坦、Tek-1与小胶质细胞单独孵育，或替米沙坦、Tek-1与PPARγ特异性拮抗剂GW9662共同孵育，用ELISA的方法检测替米沙坦和Tek-1对小胶质细胞释放的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响，用实时定量PCR的方法检测替米沙坦和Tek-1对小胶质细胞标记物CD11b、巨噬细胞标记物CD16和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的mRNA水平表达的影响；通过WesternBlot的方法检测替米沙坦和Tek-1对LPS诱导的小胶质细胞内丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）信号通路和核转录因子-κB（NF-κB）信号转导通路的影响。结果：放射配体结合实验结果表明Tek-1对AT1受体均具有较高的亲和力，其竞争抑制常数Ki值分别为1.1×10-9M；在细胞内钙离子检测实验中，Tek-1抑制AT1受体激动剂ANGⅡ激动效应的IC50值分别为1.02nM，提示Tek-1是AT1受体的阻断剂；在PPARγ报告基因检测实验中，在0.1-10μM浓度范围内，Tek-1能浓度依赖的显著激活PPARγ，但激动效应显著低于PPARγ完全激动剂罗格列酮，提示Tek-1为PPARγ的部分激动剂。分别灌胃给予替米沙坦（1、3mg/kg）和Tek-1（1、3、10mg/kg）均能显著改善AD样模型小鼠非空间记忆能力。ELISA结果显示，1mg/kg替米沙坦和1、3、10mg/kgTek-1能显著减少脑内促炎因子IL-6的表达（P值均为P<0.001），1mg/kg替米沙坦和1、3mg/kgTek-1能显著减少脑内趋化因子MCP-1的表达。在LPS诱导的BV-2小鼠小胶质细胞炎症模型中，0.1-10μM替米沙坦和10μMTek-1能显著抑制小胶质细胞释放TNF-α（P<0.001和P<0.05）；实时定量PCR结果表明，10μM替米沙坦和1、10μMTek-1均能显著抑制CD11b、CD16和iNOS基因水平表达，PPARγ特异性拮抗剂GW9662能够部分逆转替米沙坦和Tek-1的上述作用，提示其改善炎症反应的作用与部分激活PPARγ，进而抑制小胶质细胞的激活和炎性介质的释放相关；WesternBlot结果显示，0.1-10μM替米沙坦和0.1、1μMTek-1能抑制LPS诱导的BV-2小胶质细胞激活后引起的ERK、JNK和p38MAPK磷酸化水平升高以及IκB-α蛋白的降解和细胞核NF-κB蛋白的升高，PPARγ拮抗剂GW9662能部分拮抗替米沙坦和Tek-1的上述作用。结论：1、Tek-1对AT1受体具有较高的亲和力，并且能显著抑制ANGⅡ对细胞内钙离子的激活作用，为AT1受体的拮抗剂；2、与PPARγ完全激动剂罗格列酮相比，Tek-1具有部分激活PPARγ的特性；3、以替米沙坦为阳性化合物，Tek-1长时程给药同样能改善Aβ诱导的小鼠学习记忆损伤，并且Tek-1能够抑制脑内促炎细胞因子和趋化因子的释放，提示其改善学习记忆的效应与减轻脑内炎症反应密切相关；4、在体外LPS诱导的BV-2小鼠小胶质细胞的致炎模型上，Tek-1能够抑制BV-2小胶质细胞的激活和激活后释放炎性介质，其作用机制可能与部分激活PPARγ，进而抑制MAPKs及NF-κB信号通路的激活相关。
【作者】刘越；
【导师】李锦；
【作者基本信息】苏州大学，药理学，2014，硕士
【关键词】候选化合物Tek-1；替米沙坦；血管紧张素ⅡⅠ型受体拮抗剂；过氧化物酶增殖激活物受体γ；小胶质细胞；神经炎症；阿尔茨海默病；

【参考文献】
[1]黄海丽.基于Qt的心音分析系统的设计[D].济南大学,计算机技术,2012,硕士.
[2]丁颜颜.用于紫外光电器件高质量AlN模板的MOCVD生长[D].华中科技大学,光学工程,2013,硕士.
[3]王良豫.计算机辅助语言学习基础下的高中英语听力教学研究[D].华中师范大学,学科教学,2013,硕士.
[4]马锦儒.DECnet网络环境下实时通讯软件的开发[J].冶金自动化,1996,02:37-39.
[5]王绪玲.合谷刺法治疗肩背部肌筋膜炎的临床观察[D].黑龙江中医药大学,针灸推拿学（专业学位）,2013,硕士.
[6]单志宏.北满特钢公司薪酬体系诊断与再设计[D].天津商业大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[7]乌兰塔娜.苏尼特羊肌肉共轭亚油酸含量分析及稳定性研究[D].内蒙古农业大学,农产品加工及贮藏工程,2004,硕士.
[8]王睿.特殊形态结构导电高分子材料温阻效应研究[D].河南科技大学,化学工程（专业学位）,2014,硕士.
[9]蒋毅.班级管理中学生公共精神问题剖析与对策研究[D].西南大学,教育经济与管理,2013,硕士.
[10]苏静波.中国鼻咽癌患者放射敏感性的蛋白标志物：meta分析[D].吉林大学,临床医学,2013,硕士.
[11]李涛.大城市郊区流动人口生活发展和社会适应的空间分析[D].复旦大学,人口、资源与环境经济学,2012,硕士.
[12]周立斌,乔小明.钢结构企业与工程总承包管理[J].住宅产业.2007(08)
[13]王科平.高效率射频功率放大器的研究[D].浙江大学,2006.
[14]陈雷鸣.蕲蛇不同剂型对CIA模型大鼠抗炎作用的比较研究[D].浙江中医药大学,中医内科学,2014,硕士.
[15]张潇匀.后殖民女性主义视角下《喜福会》中华裔女性的创伤研究[D].沈阳师范大学,英语语言文学,2014,硕士.
[16]张俊杰.江西省基层全科医生转岗培训效果评估[D].南昌大学,成人教育学,2012,硕士.
[17]俞荣华,田增平,周傲英.一种检测多语言文本相似重复记录的综合方法[J].计算机科学,2002,01:118-121.
[18]叶孙洁.导电聚合物纳米复合材料及稀土配位高分子的构筑与性质研究[D].南京大学,高分子化学与物理,2011,博士.
[19]庞博.沈阳市环境技术政策研究[D].东北大学,行政管理,2010,硕士.
[20]高云.城轨列车车门系统关键部件可靠性研究[D].北京交通大学,2014.
[21]闫莉娜.甘肃省农村贫困新特点及扶贫策略调整研究[D].兰州大学,马克思主义中国化,2013,硕士.
[22]彭丹丹.OFDM原理及其同步、信道估计和解映射算法研究[D].浙江大学,通信与信息系统,2004,硕士.
[23]王卉.特殊教育（体育）专业课程设置的比较研究[D].江苏师范大学,体育教育训练学,2013,硕士.
[24]李斌.二极管泵浦Nd:YVO_4固体激光器谐振腔及耦合系统的研究[D].华中科技大学,光学工程,2013,硕士.
[25]任海.基于ACIS的反坦克导弹飞行仿真[D].中北大学,弹箭飞行与控制工程,2013,硕士.
[26]徐宁宁.辽宁中行汽车经销商客户关系管理研究[D].大连理工大学,工商管理（专业学位）,2012,硕士.
[27]任鹤.基于dsRNA的烟草和番茄抗双生病毒基因工程研究[D].浙江大学,植物病理学,2012,硕士.
[28]江国才.提高农民满意度视角的农村政府管理审计研究[D].西南财经大学,会计学,2014,博士.
[29]何赟燕.面向同步装卸的集装箱码头集成调度方法[D].宁波大学,机械制造及其自动化,2013,硕士.
[30]虞东海.基于DSP的矢量控制变频调速系统[D].浙江大学,控制理论与控制工程,2004,硕士.
[31]李姗姗.被追诉人的阅卷权研究[D].南京大学,诉讼法学,2013,硕士.
[32]卢国锋,卢敬萱.历届高考化学试题“组合”应用策略[J].数理化学习(高三版),2014,01:45-48.
[33]王岚.成都市银行卡联网通用模式及问题探讨[D].西南财经大学,工商管理,2003,硕士.
[34]郭云菁.公众考古传播研究[D].复旦大学,考古与博物馆学,2012,硕士.
[35]杨立铭.刑事再审程序的反思与重构[D].中国政法大学,法律,2004,硕士.
[36]张红卫.基于科技文献的时序主题链构建方法研究[D].大连理工大学,管理科学与工程,2013,硕士.
[37]向导.春秋战国时期都城防御体系初步研究[D].西北大学,考古学及博物馆学,2014,硕士.
[38]汤薛.巨型框架主框架层数变化的抗震性能的研究[D].安徽建筑工业学院,结构工程,2012,硕士.
[39]周金祥.英语专业学生在同题口笔语叙事作文中词块使用情况比较研究[D].扬州大学,英语语言文学,2012,硕士.
[40]李逢兵,谢开贵,张雪松,汪科,周丹,赵波.基于锂电池充放电状态的混合储能系统控制策略设计[J].电力系统自动化,2013,01:70-75.
[41]王彩敏.高中议论文写作教学策略研究[D].河北师范大学,学科教学,2014,硕士.
[42]黄中杰.社交网络中的视频观看质量优化[D].复旦大学,计算机软件与理论,2012,硕士.
[43]林中姮.三种经济红藻核糖体基因簇的克隆与分析[D].苏州大学,细胞生物学,2012,硕士.
[44]蔡俊俊.模块化生产模式下高铁建设工程供应链物流研究[D].西南交通大学,物流工程,2013,硕士.
[45]杨柳.环保上市公司债务融资对绩效的影响研究[D].浙江理工大学,产业经济学,2014,硕士.
[46]塔诺赛.老挝电信企业发展战略研究[D].吉林大学,企业管理,2014,硕士.
[47]周佩佩.基于HPM方法的武汉市公共开放空间价值评估[D].华中科技大学,土地资源管理,2013,硕士.
[48]王铁男,陈涛,贾镕霞.战略柔性对企业绩效影响的实证研究[J].管理学报,2011,03:388-395.
[49]刘永玲.基于ARM9和Linux的人脸识别系统的研究[D].北京交通大学,2013.
[50]彬巴苏荣.中蒙两国旅游合同比较研究[D].内蒙古大学,民商法学,2014,硕士.