蛇床子素对脂多糖诱导3T3-L1细胞分泌炎症细胞因子的影响

【摘要】目的：观察蛇床子素对脂多糖刺激3T3-L1脂肪细胞分泌炎症细胞因子的抑制作用，并探讨其可能的作用机制。方法：将3T3-L1细胞经经典的“鸡尾酒”法诱导为成熟的脂肪细胞，并随机分为正常对照组，DMSO组，脂多糖组，蛇床子素（0.025,0.1和0.4μg/ml）三个浓度组，脂多糖+蛇床子素（0.025,0.1和0.4μg/ml）三个浓度组，非诺贝特200μg/ml组和罗格列酮10μg/ml组。药物处理组细胞先用相应的药物作用2h后加入脂多糖2μg/ml刺激6h，然后用ELISA法测定培养上清液中TNF-α和IL-6的水平，用Westernblot法测定PPARα/γ和NF-κB的蛋白表达情况，用免疫细胞化学法观察NF-κB的胞核转位情况。为了进一步明确蛇床子素对脂多糖刺激的3T3-L1细胞分泌炎症细胞因子的抑制作用是否与激活PPARα/γ有关，以PPARα拮抗剂4μMMK886或/和PPARγ拮抗剂10μMGW9662预处理2h，再加入0.4μg/ml的蛇床子素作用2h，最后加入脂多糖2μg/ml刺激6h，然后观察培养上清液中TNF-α和IL-6的水平、NF-κB的蛋白表达以及胞核转位情况。结果：用蛇床子素0.025，0.1和0.4μg/ml作用于成熟的脂肪细胞8h后，培养上清液中TNF-α和IL-6的水平均未见有明显的变化，细胞中的PPARγ和NF-κB蛋白表达也未见有明显的变化，但PPARα蛋白表达明显增加（P<0.05或P<0.01）。诱导成熟的脂肪细胞，在用脂多糖2μg/ml刺激6h后，可使培养上清液中TNF-α和IL-6的水平增加（P<0.05），相应的NF-κB蛋白表达也增加（P<0.01），而PPARα蛋白表达降低（P<0.01）。用蛇床子素0.025，0.1和0.4μg/ml处理2h后再加入脂多糖2μg/ml刺激6h，则培养上清液中TNF-α的水平呈剂量依赖性降低，尤其是0.4μg/ml组的作用更为明显（P<0.01）。蛇床子素也可降低IL-6的水平，但以0.025μg/ml组的作用较强（P<0.01）。蛇床子素能够增加脂多糖刺激的成熟脂肪细胞中PPARα/γ的蛋白表达（P<0.05或P<0.01），降低NF-κB的蛋白表达（P<0.05或P<0.01）及胞核转位。如预先给予PPARα拮抗剂MK886或/和PPARγ拮抗剂GW9662后，蛇床子素0.4μg/ml抑制这些相关炎症因子和NF-κB的蛋白表达及胞核转位的作用被减弱或取消。结论：蛇床子素可以抑制脂多糖刺激成熟脂肪细胞分泌炎症细胞因子TNF-α和IL-6，其作用机制与通过激活PPARα/γ后，减少NF-κB的蛋白表达和胞核转位有关。
【作者】王晓丽；
【导师】谢梅林；
【作者基本信息】苏州大学，药理学，2014，硕士
【关键词】蛇床子素；3T3-L1脂肪细胞；TNF-α；IL-6；PPARα/γ；NF-κB；

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