肝母细胞瘤的分子病理学特点和临床病理学意义的研究

【摘要】研究背景：肝母细胞瘤（hepatoblastoma，HB）是一种少见的恶性肿瘤，人群中的发病率不足百万分之一，但却是儿童最常见的肝脏恶性肿瘤，占全部儿童恶性肿瘤的1%，占儿童肝脏恶性肿瘤的90%。由于发病率较低，研究较少，尽管有研究表明HB组织中存在一系列的基因变异，但HB的发生的分子机制还不是很明确。目前，国内外较少有单中心大样本HB临床病理和分子病理特点的研究。我科从1984年1月1日-2013年12月31日，共诊断了本单位手术切除治疗的18岁以下HB患者50例，占我科肝脏恶性肿瘤的0.1%。本课题基于该50例HB，对其进行临床病理特点、基因组微卫星变异特征和microRNA-373(miR-373)差异表达特点的研究。研究目的：1.分析50例18岁以下HB患者临床病理特点、主要临床病理指标及其对HB生物学行为的影响，探讨其对预后评估的指导意义；2.研究33例HB组织的10个基因组微卫星标志物变异特点与HB生物学行为的关系，选择有价值的分子病理检测标志物，探讨HB基因组微卫星变异的临床和病理学意义；3.检测25例HB组织及配对肝组织差异表达特点，探讨miR-373与HB生物学行为的关系，评估其可能的临床和病理学意义。研究方法：1.选取第二军医大学附属东方肝胆外科医院在1983年1月1日-2013年12月31日期间，手术切除的、病理诊断明确的、年龄小于18岁的HB病例共50例，收集患者的临床参数及术后随访资料；回顾性分析病理诊断报告及并复习病理切片，收集患者的病理学参数及免疫组化结果，对50例HB患者的各临床病理学参数进行统计学分析；2.采用显微组织切割基础上的PCR-SSCP检测方法，选取33例HB组织和对应瘤旁肝组织进行10个微卫星位点不稳定性（microsatelliteinstability,MSI）和杂合性缺失（lossofheterozygosity,LOH）检测，对HB的临床和病理特征与微卫星MSI和LOH的相关性进行对比分析，以P＜0.05为有差异的标准；3.采用荧光定量PCR法，检测25例HB瘤组织和瘤旁肝组织内miR-373的差异表达情况，通过表达量的不同将HB分组，将HB的主要临床病理参数与miR-373的差异表达分组进行相关性分析，以P＜0.05为有差异的标准。研究结果：1.50例HB患者中，男性36例，女性14例，男女比例为2.6:1，平均年龄43.56月（6月-210月）；TNMⅡ期22例，Ⅲ期6例，Ⅳ期22例，男性患者较女性的分期更差（P=0.015）；10例（100%）无包膜的病例均为男性，男性患者包膜形成率较低（P=0.027）；TNM为Ⅲ/Ⅳ期的患者血清AFP≥1000μg/L的比例（92.9%）显著高于Ⅱ期的患者（59.1%）（P=0.004）；有瘤栓形成患者的血清AFP≥1000μg/L的比例（100%）显著高于无瘤栓患者（70%）（P=0.026）；单纯胎儿型HB血清AFP＜1000μg/L的比例（33.3%）显著高于其他类型HB（8.7%）（P=0.036）；有卫星灶的HB同时有瘤栓形成的比例（61.5%）显著高于无卫星灶的HB（13.5%）（P=0.001）；CK19免疫组化染色阳性的HB（57.1%）侵犯包膜的比例显著高于阴性的HB（12%）（P=0.026）；上皮间叶混合型HB直径≥10cm的比例（100%）明显高于其他类型的HB（50%）（P=0.009）；位于肝左叶的HB上皮间叶混合型（75%）的比例明显高于上皮型（26.2%）的HB（P=0.008）；位于左叶的HB（82.4%）直径大于10cm比例明显高于肝右叶（45.5%）（P=0.012）。2.在33例HB中，10个位点的微卫星LOH和MIS的发生率分别为66.67%（22/33）和54.55%（18/33），总微卫星变异率为84.85%（28/33），每例HB微卫星位点变异频数为0-4个位点；在10个微卫星检测位点中，所有的微卫星位点均有LOH或MIS发生，变异率范围为3.03%-36.36%，总体变异率为16.67%，其中以D11S4680、D11S1363和D11S1363变异率较高，分别为36.36%、33.33%和27.27%。在发生微卫星位点D11S1318、D11S4734、D11S1363、D11s4088变异的HB（77.8%），呈肝外生性生长的比例明显高于未发生该位点微卫星变异的HB（40%）（P=0.038）；TNM为Ⅳ期的HB（100%），微卫星LOH率明显高于Ⅱ/Ⅲ期的HB（54.5%）（P=0.013）。3.与瘤旁肝组织相比，25例HB组织中有7例miR-373表达上调超过2倍以上，平均miR-373表达水平高于瘤旁肝组织3.6倍，最高的一例为36.43倍，8例下调低于2倍以上，HB组织miR-373的差异表达情况与瘤体直径相关，随着表达量的增高，瘤体直径有增大的趋势（P=0.047）。4.本组随访20例，存活14例（70%），平均生存时间22月，死亡6例(30%)。生存分析显示血清AFP水平、瘤栓形成及肿瘤生长方式是术后总生存率的影响因素。结论：1.HB男性患者明显多于女性，且男性患者、血清AFP≥1000μg/L、较高TNM分期、有瘤栓或卫星灶形成、肿瘤生长方式、CK19免疫组化染色阳性、上皮间叶混合型HB及肿瘤位于肝左叶等参数是HB的生物学行为及预后的相关因素；2.微卫星位点D11S1318、D11S4734、D11S1363变异发生率较高（27%-36%），可作为HB分子病理诊断检测的一线标志物，发生微卫星位点D11S1318、D11S4734、D11S1363、D11s4088变异、肿瘤呈肝表面外生生长、高微卫星LOH发生率等也可能提示肿瘤具有较强的侵袭能力；3.miR-373在HB组织中表达量升高时，肿瘤直径明显增大，可能提示miR-373能够导致肿瘤生长更加活跃。4.本研究提出了HB的临床和分子病理学特点，对了解HB的生物学特性、判断生物学行为特点以及评估预后有较好的参考价值。
【作者】朱玉瑶；
【导师】丛文铭；
【作者基本信息】苏州大学，病理学与病理生理学，2014，硕士
【关键词】肝母细胞瘤；生物学特性；微卫星；杂合性缺失；miR-373；

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