STAT3介导IL-6对细胞自噬抑制作用的研究

STAT3介导IL-6对细胞自噬抑制作用的研究

作者:师大云端图书馆 时间:2017-12-30 分类:参考文献 喜欢:2841
师大云端图书馆

【摘要】目的:探讨IL-6对饥饿诱导的细胞自噬过程的影响及其分子机制。方法:将实验分为对照组、饥饿组及饥饿+IL-6组,首先采用westernblot法检测了LC3蛋白的表达水平,细胞免疫荧光法统计LC3荧光点的量并借助电镜观察细胞内自噬泡数量变化和形态特征;westernblot法检测并筛选自噬及IL-6下游主要通路蛋白表达水平;然后,采用关键信号分子的抑制剂并构建其突变体等方法,进一步检测其在IL-6抑制自噬中的作用,同时通过Beclin1siRNA,Atg14siRNA的干扰实验分析IL-6影响自噬过程的分子机制。结果:(1)我们发现,在饥饿处理的U937细胞内,外源IL-6(30ng/ml)的添加降低了LC3-9Ⅱ/LC3-Ⅰ比值,且二者的比值随IL-6浓度的增加而减小,同时IL-6的处理下调了免疫荧光反应中LC3的荧光点数,表明IL-6负向调控细胞自噬过程。(2)饥饿诱导下,细胞内与自噬相关的主要信号分子Akt,ERK1/2,STAT3的磷酸化水平均发生变化。IL-6(30ng/ml)添加后,Akt,ERK1/2的磷酸化水平未发生明显变化,但STAT3的磷酸化水平明显升高,活化了胞内STAT3通路,并促进了Bcl-2的表达,同时胞内自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著下调,p62未发生明显降解。(3)STAT3抑制剂LLL12作用于细胞后,P-STAT3活性显著降低,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ,Beclin1及VPS34蛋白水平均有明显的上调;突变体STAT3Y705F的转染实验表明,IL-6的处理不影响STAT3Y705F转染的细胞内的自噬水平。(4)在Beclin1siRNA,Atg14siRNA转染的细胞中,IL-6的添加不影响饥饿作用后胞内自噬相关蛋白的表达水平。结论:综上所述,(1)IL-6抑制细胞自噬,STA3T介导IL-6抑制细胞自噬过程;(2)Beclin1,Atg14参与IL-6抑制细胞的自噬过程。深入探讨IL-6与细胞自噬的关系,将有助于探究与IL-6密切相关疾病的致病机制。
【作者】秦倍倍;
【导师】丁世萍;
【作者基本信息】浙江大学,人体解剖与组织胚胎学,2014,硕士
【关键词】自噬;IL-6;STAT3;

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