Notch4通路与LCWE诱导的冠状动脉损伤关系的初步探讨

【摘要】目的：借助于LCWE诱导的川崎病冠状动脉炎的小鼠模型,探究Notch4信号通路在川崎病免疫性冠状动脉炎中的作用。方法：干酪乳杆菌购自CICC(中国工业微生物菌种保藏管理中心),取对数生长期细菌用于所有实验。第一部分：LCWE诱导的冠状动脉炎动物模型的建立干酪乳杆菌首先在MRSbroth中培养24小时,SDS过夜裂解细菌,依次加入RNase,DNase和胰酶,超声处理破碎细胞,离心取上清,使用硫酸-苯酚比色法检测上清液中糖总量。向BALB/c小鼠腹腔注射LCWE0.5ml(处理组)和PBS0.5ml(对照组),3天、7天、14天及28天后处死小鼠,取心脏和脾脏用4%多聚甲醛中常规固定,HE染色观察心脏和脾脏的病理变化。使用Real-timePCR技术检测脾脏Thl/Th2细胞因子谱的变化。第二部分：Notch4通路与LCWE诱导的冠状动脉损伤关系3天、7天、14天及28天摘除小鼠眼球取血,先后加入cd34-eFlour66010ul,Flk-1FITC2ul,Notch4-PE5ul,cd45-PE-Cy5.50.5ul孵育,上机检测外周血单个核细胞中EPCs含量及其表面Notch4表达情况。设计引物GAPDH、Notch4、RBP-JK、vcam-1和P-selectin,使用Real-timePCR技术检测胸主动脉、心肌组织Notch4、RBP-JK、vcam-1和P-selectinmRNA表达情况。使用免疫组化技术检测胸主动脉、冠状动脉起始部vcam-1和P-selectin表达情况。结果：第一部分：LCWE诱导的冠状动脉炎动物模型的建立1.3天时实验组小鼠体重明显减轻。2.心肌HE染色显示各时间点实验组冠状动脉及其分支靠血管外膜处出现炎症细胞浸润。3.实验组脾脏大体观察脾脏体积增大,重量增加,HE染色发现各时间点主要以脾小体增生,融合。4.实验组除IL-6外,其他Thl/Th2细胞因子表达量显著增加。第二部分：Notch4和RBP-JK与冠状动脉损伤相关1.LCWE注射3天小鼠外周血循环内皮祖细胞的含量显著高于对照组,14天时实验组EPCs含量低于对照组；LCWE注射7天EPCs表面Notch4表达量明显高于对照组。2.14天,28天实验组胸主动脉P-selectinmRNA和RBP-JKmRNA表达水平显著高于对照组,P-selectin与RBP-JK,Notch4与vcam-1显著相关；心肌中P-selectin与RBP-JK显著相关。3.实验组冠状动脉起始部血管内皮细胞vcam-1表达除7天外,各时间点表达均不同程度升高,其中以3天组升高最为明显；胸主动脉中段实验组3,7天vcam-1表达高于对照组,但表达强度不及3天冠脉起始部；实验组P-selectin冠脉起始部14天,28天表达高于对照组,胸主动脉中段14天时强于对照组。结论：1.循环内皮祖细胞Notch4信号通路参与了LCWE诱导的冠状动脉炎的发生和发展。2.血管内皮细胞Notch4信号通路与LCWE诱导的冠状动脉损害有关。3.血管内皮细胞Notch4信号通路的改变影响了冠状动脉内皮细胞的功能。
【作者】高立超；
【导师】龚方戚；
【作者基本信息】浙江大学，儿科学，2014，硕士
【关键词】川崎病；Notch4；RBP-JK；循环内皮祖细胞；血管细胞粘附分子-1；P选择素；

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