鼓室内庆大霉素注射在外周前庭分布和损伤的研究

【摘要】第一部分：鼓室内庆大霉素注射在外周前庭的时间和空间分布研究一、GTTR鼓室内注射后在外周前庭的时间和空间分布目的：应用庆大霉素德克萨斯红耦合物(gentamicin-conjugatedTexasRed,即GTTR)鼓室内注射后观察其在外周前庭的时间和空间分布特点。方法：成年豚鼠行鼓室内GTTR(O.1mg/ml,50ul)注射一次,在注射后12h、24h、3d、7d、14d、28d处死动物,anti-Calretinin标记前庭Ⅰ型毛细胞,DAPI染核,运用激光共聚焦扫描显微镜观察GTTR在外周前庭的聚集和分布情况。并进行荧光密度半定量分析。结果：鼓室内GTTR一次性注射后在12小时即可见在外周前庭终末器官的Ⅰ型及Ⅱ型毛细胞、移行细胞、半月面细胞有明显聚集,在毛细胞中GTTR荧光颗粒主要聚集于表皮板及其下方,胞浆内可见极少量的弥散性分布；移行细胞和半月面细胞中的GTTR主要分布于核上区；暗细胞、支持细胞、半规管上皮细胞未见明显GTTR颗粒聚集。GTTR荧光颗粒在外周前庭感觉上皮3-7天聚集达到最高峰,并持续到28天荧光强度有明显的下降(P<0.05)；在移行细胞和半月面细胞至第28天仍可见明显聚集。GTTR在球囊斑的聚集分布较椭圆囊斑多,且有显著性统计学差异(P<0.05),GTTR在后半规管的分布聚集较其他两个半规管为多,但统计学无显著性差异(P>0.05)。结论：庆大霉素可聚集分布于外周前庭的感觉上皮中,其分布高峰位于3-7天,在28天有明显下降。庆大霉素在球囊斑的分布较椭圆囊斑为多。庆大霉素可以聚集分布在移行细胞、半月面细胞中。庆大霉素在暗细胞没有明显分布。二不同浓度GTTR鼓室内注射在外周前庭的分布目的：观察不同浓度的GTTR鼓室内一次性注射在半规管壶腹嵴的分布情况,从而了解不同类型的毛细胞对庆大霉素的吸收聚集特点。方法：将不同浓度的(GTTR(0.1,0.4,0.8mg/ml)行鼓室内庆大霉素注射后在庆大霉素时间分布的高峰第七天处死动物,anti-Calretinin标记前庭中央区Ⅰ型毛细胞,DAPI标记细胞核,激光共聚焦扫描显微镜进行,观察不同类型的细胞的吸收聚集情况,并进行荧光半定量分析。结果：O.lmg/mlGTTR浓度组可见庆大霉素主要分布于毛细胞的表皮板及其下方,胞浆内可见非常微弱的荧光分布,随着浓度的增加至0.4mg/ml,GTTR在中央区Ⅰ型毛细胞的分布由主要聚集于表皮板下到开始出现较多胞浆弥散性分布,至0.8mg/ml周边区Ⅰ型毛细胞也开始出现较弥散性分布,GTTR在Ⅱ型毛细胞中始终聚集于顶端未出现胞浆明显弥散性分布,统计学显示GTTR在三种类型的毛细胞中的分布有明显统计学差异(P<0.05)。GTTR在移行细胞和半月面细胞低浓度时即有分布,但并未随着浓度的增加有明显增加,也未出现胞浆弥散性分布。结论：庆大霉素在半规管感觉上皮毛细胞的分布具有从中央区Ⅰ型毛细胞到外周区Ⅰ型毛细胞,再到Ⅱ型毛细胞的浓度梯度分布特点。庆大霉素在移行细胞和半月面核上区有明显聚集,但并未随浓度增加出现胞浆弥散性分布。三、小剂量庆大霉素鼓室内注射在外周前庭的分布目的：观察小剂量的庆大霉素鼓室内一次性注射在外周前庭的分布情况,从而了解庆大霉素在前庭聚集分布特点,并与GTTR在外周前庭的分布进行对比。方法：将庆大霉素(5mg/ml)行鼓室内一次性注射第7天处死动物,Anti-Gentamicin染色,DAPI标记细胞核,激光共聚焦扫描显微镜进行,观察庆大霉素抗体染色在壶腹嵴和囊斑的荧光分布,并进行荧光半定量分析。结果：庆大霉素在感觉上皮细胞中可呈浓度梯度分布,首先分布中央型Ⅰ型毛细胞,其次为周边型Ⅰ型毛细胞,最后为Ⅱ型毛细胞。荧光半定量分析各类型细胞之间的分布有统计学差异(P<0.05),这一分布特点与GTTR相类似。庆大霉素在移行细胞、半月面细胞未见明显聚集分布,这一现象与GTTR研究结果不相同。结论：庆大霉素在壶腹嵴毛细胞的分布具有从中央区Ⅰ型毛细胞到外周区Ⅰ型毛细胞,再到Ⅱ型毛细胞的梯度分布特点。与庆大霉素抗体相比,GTTR有更高的灵敏度。第二部分庆大霉素对外周前庭损伤性研究目的：探讨庆大霉素对外周前庭壶腹嵴和囊斑的损伤情况及其分布之间的关系。方法：不同浓度庆大霉素(15,30mg/ml)行豚鼠鼓室内注射后,在第7天和28天分别处死动物,三个半规壶腹嵴行冰冻切片后用anti-Calretinin标记前庭中央区Ⅰ型毛细胞,anti-tencisin标记所有Ⅰ型毛细胞,DAPI标记细胞核。两个囊斑,用phalloidin-TRIRC标记纤毛。荧光显微镜及激光共聚焦扫描显微镜扫描拍片,Image-pro-plus图像处理,SPSS进行统计学分析。结果：庆大霉素浓度15mg/ml7天组动物可见半规管中央区Ⅰ型毛细胞的神经盏有部分回缩或者完全回缩到支持细胞层,细胞核密度较正常对照组无明显差异。周边型Ⅰ型毛细胞无明显改变,庆大霉素浓度15mg/ml28天组及30mg/ml7天组可见Ⅰ型毛细胞的神经盏均回缩到基膜层；周边型Ⅰ型毛细胞无明显改变或者部分减少,中央区细胞核密度较正常减少；庆大霉素30mg/ml28天组可见中央型Ⅰ型细胞均回缩到基膜层,周边型Ⅰ型毛细胞明显减少,中央区和周边区细胞核均较正常减少形成单层感觉上皮细胞。庆大霉素注射后7天组动物,可见微纹区纤毛首先受损,球囊斑残余毛细胞较椭圆囊斑多。28天组可见球囊斑纤毛较椭圆囊斑多,球囊斑较椭圆囊斑多。结论：庆大霉素在壶腹嵴感觉上皮的损伤同分布相一致,呈现从中央Ⅰ型到周边Ⅰ型最后到Ⅱ型的梯度损伤特点。庆大霉素在囊斑的损伤同分布呈负相关,椭圆囊对庆大霉素损伤较球囊更为敏感。第三部分、豚鼠外周前庭器官体外培养GTTR的分布特点目的：观察成年豚鼠外周前庭器官体外悬浮培养时,GTTR在外周前庭器官的聚集分布特点,并与在体分布进行比较。方法：成年豚鼠椭圆囊斑和半规管分离,去除耳石和剪开壶腹嵴相对应的膜性组织后进行体外培养。培养液中加有GTTR(0.00125mg/ml),在培养后30min、2h进行观察,冰冻切片后anti-calretinin,Phalloidin,DAPI染色后运用激光共聚焦扫描显微镜观察GTTR聚集和分布情况。结果：成年豚鼠椭圆囊斑体外培养在30分钟、2小时均有较好的形态,纤毛生长良好；半规管30分钟,2小时壶腹嵴感觉上皮细胞核排列整齐。体外培养状态下GTTR在壶腹嵴感觉上皮细胞中分布同在体分布,首先分布于中央区Ⅰ型毛细胞,其次为周边区Ⅰ型毛细胞,最后为Ⅱ型毛细胞。体外培养时GTTR首先分布于球囊斑的微纹区,与在体实验相符。结论：豚鼠外周终末器官体外培养时在壶腹和囊斑的分布与体内类似。壶腹帽和耳石移动引起的细胞纤毛弯曲度的不同并不是壶腹嵴感觉上皮中央区和周边区Ⅰ型细胞的分布差异的主要原因。
【作者】张茹；
【导师】戴春富；
【作者基本信息】复旦大学，耳鼻咽喉科学，2010，博士
【关键词】庆大霉素；前庭毛细胞；暗细胞；移行细胞；半月面；毛细胞；前庭毒性；壶腹嵴；椭圆囊斑；

【参考文献】
[1]韦金池.水稻谷胱甘肽过氧化物酶基因OsGPX3和OsGPX4的分子特性研究[D].北京林业大学,生化与分子生物学,2013,硕士.
[2]陈卓.我国上市公司现金股利政策与公司绩效相关性研究[D].湖北工业大学,产业经济学,2014,硕士.
[3]柯毅凤.耳穴贴压对肾虚血瘀型LUFS不孕患者尿LH峰及排卵影响的临床观察[D].福建中医药大学,中医妇科学（专业学位）,2013,硕士.
[4]J.E.克雷尔伯特.地球物理资料处理基础[J].石油地球物理勘探,1978,02:69-72.
[5]王岚.员工可雇佣性对职业生涯管理及其绩效的影响研究[D].浙江工业大学,2012.
[6]张克松.柴油机燃烧的数值模拟研究[D].山东大学,2013.
[7]彭程.永磁直驱风力发电系统控制策略及实验系统研究[D].浙江大学,2013.
[8]刘晓强.格非短篇小说《凉州词》和《苏醒》英译实践报告[D].河北大学,英语笔译,2014,硕士.
[9]杜海峰.硫自养反硝化处理模拟地下水硝酸盐研究[D].河北科技大学,环境科学与工程,2014,硕士.
[10]田松,张凤鸣,苏恩泽,惠晓滨.基于仿真的装备管理概念下的协同决策研究[J].控制与决策,2003,03:300-303+308.
[11]权恩雷.齐鲁石化公司醇类产品电子商务营销方案研究[D].大连理工大学,工商管理,2004,硕士.
[12]王盛业.动静压气体止推轴承结构参数正交试验研究[D].大连海事大学,机械工程,2014,硕士.
[13]蒙振宇.商业银行信贷风险管理研究[D].天津大学,企业管理,2004,硕士.
[14]聂朦朦.论我国农村基层纠纷的行政调解[D].安徽大学,法律,2014,硕士.
[15]王咏薇.CAPE等环境参数在强对流风暴分析中的应用研究[D].南京气象学院,气象学,2004,硕士.
[16]夏友山.三环减速器的动力学性能研究[D].东北石油大学,机械电子工程,2013,硕士.
[17]刘亚虎.音频小功率静电感应晶体管的制作工艺[D].兰州大学,集成电路工程（专业学位）,2014,硕士.
[18]施晓春.标本兼治加速国有商业银行改革[D].吉林大学,金融学,2004,硕士.
[19]孙永进.LARS人工韧带重建膝前交叉韧带后5年系列随访研究[D].苏州大学,临床医学（专业学位）,2013,硕士.
[20]王铖健.管流气泡—颗粒强化碰撞机理研究[D].中国矿业大学,流体力学,2014,硕士.
[21]刘晓培.我国城市低龄老年人力资源开发研究[D].华东师范大学,行政管理,2013,硕士.
[22]肖月宁.基于网络的“多媒体课件原理与制作”课程设计[D].曲阜师范大学,课程与教学论,2004,硕士.
[23]朱建彪.低碳经济背景下株洲石峰区旧工业建筑改造策略研究[D].湖南大学,建筑学,2011,硕士.
[24]黄雯雯.中国大学生称谓语缺位现象的实证研究[D].南京师范大学,英语语言文学,2012,硕士.
[25]严逗.Textlinguistische Analyse der deutschen Stellenanzeige im Internet[D].西安外国语大学,德语语言文学,2014,硕士.
[26]谢婷婷.聚合物/石墨烯/稀土导电功能材料的制备及性能研究[D].西北师范大学,2013.
[27]陈咪.WTO框架下碳标签法律制度研究[D].大连海事大学,国际经济法,2014,硕士.
[28]李国媛.模糊描述逻辑扩展模糊软集的研究[D].东北师范大学,计算机应用技术,2012,硕士.
[29]董瑞春.采煤机螺旋滚筒煤岩石截割的数值模拟技术研究[D].辽宁工程技术大学,机械制造及其自动化,2012,硕士.
[30]于真.我国家族企业成功传承的核心影响因素研究[D].浙江工业大学,2009.
[31]张敏华.氧化葡萄糖酸杆菌D-木糖代谢途经的遗传分析[D].华东理工大学,发酵工程,2013,硕士.
[32]刘宝凯.基于UEFI的病毒扫描引擎的设计与实现[D].北京工业大学,计算机技术（专业学位）,2013,硕士.
[33]赵江波.糖尿病大鼠心肌超微结构的病变及PPARgamma激动剂对其影响的研究[D].浙江大学,内科学,2004,硕士.
[34]王金保.敦煌遗书P.3715“类书草稿”校注研究[D].兰州大学,历史文献学,2013,硕士.
[35]蒋海峰.多核平台下基于CnC的车辆识别算法的并行优化[D].东北大学,计算机应用技术,2010,硕士.
[36]杜小颖.种植体表面两种微弧氧化膜生物相容性的实验研究[D].大连医科大学,口腔临床医学,2012,硕士.
[37]连盼.江汉平原农户消费行为的时空间结构研究[D].华中师范大学,人文地理学,2014,硕士.
[38]李岳洪.基于智能算法的认知无线网络关键技术研究[D].广东工业大学,检测技术与自动化装置,2013,硕士.
[39]王建.宁夏农村生活污水治理工程实用技术研究[D].西安建筑科技大学,环境工程,2013,硕士.
[40]阮进勇（NguyenTienDung）.胡志明外交思想及其历史作用与当代价值研究[D].湖南师范大学,国际政治,2014,硕士.
[41]刘君强,孙晓莹,王勋.挖掘多支持率分类规则的虚拟投影算法[J].计算机应用与软件,2003,09:8-10.
[42]岳丰.北京轨道交通指挥中心数据仓库系统ETL的设计与实现[D].北京交通大学,软件工程（专业学位）,2013,硕士.
[43]任兴凤.组织蛋白酶K高选择性抑制剂的设计合成、活性检测及相关机理研究[D].吉林大学,物理化学,2012,硕士.
[44]梁敏洪.北京社区Ⅱ型糖尿病患者生命质量及其影响因素研究[D].北京中医药大学,社会医学与卫生事业管理,2014,硕士.
[45]马腾.钢管混凝土界面粘结强度试验研究[D].华东交通大学,结构工程,2013,硕士.
[46]耿俊峰.房地产开发项目投资收益管理研究[D].大连理工大学,土木工程管理,2013,硕士.
[47]蔡颖佶,徐鹏.熵、能源与生态建筑[J].住宅科技.2007(09)
[48]曹程.《人民日报》（海外版）台港澳侨专版有关台湾报道的研究[D].湖北大学,传播学,2012,硕士.
[49]姚伟键.基于平衡记分卡分析框架的企业并购整合研究[D].重庆大学,2005.
[50]宋国芬.双光子核糖核酸荧光探针和线粒体探针的设计、合成及成像应用[D].山东大学,材料学,2013,硕士.