Notch1信号活化促进肾癌细胞增殖的机制研究及NY-ESO-1/DC相互作用增敏全细胞肾癌疫苗的实验研究

【摘要】第一部分：Notchl信号通过上调PI3K/Akt通路活性促进肾癌细胞增殖的分子机制研究目的Notchl信号通路和PI3K/Akt信号通路在肾透明细胞癌中过度活化,而且二者参与了肾癌的发生。本研究试图证明Notchl信号通过上调PI3K/Akt通路的活性而促进肾癌细胞增殖这一假设。方法首先,为了明确肾透明细胞组织中Notchl信号通路的活性状态,我们用Westernblot的方法检测了16对新鲜肾癌和正常肾旁组织中Jagged1配体、Notchl受体的活性片段(ICNl)和下游靶基因(Hes1)的蛋白水平。然后,我们在三株肾癌细胞系和一株永生化的肾小管上皮细胞系中开展体外的机制和功能研究。我们用不同的方法上调或下调肾癌细胞中Notchl信号的活性后,用Westernblot的方法检测Akt的磷酸化水平。为了进一步分析Notchl和PI3K/Akt信号通路对细胞增殖的影响,我们在不同条件下检测了细胞增殖实验、克隆形成实验、细胞周期实验。最后,我们用免疫组化的方法在组织芯片中验证体外实验的结果。结果在肾透明细胞癌的临床标本和细胞系中都存在Notchl信号通路的过度活化。异常活化的Notchl信号可以通过激活PI3K/Akt信号促进肾癌细胞增殖、粘附非依赖生长和G1-S期的细胞周期进展,进而促进肾癌发生发展。免疫组化的结果表明Notchl的表达水平与pAkt和Ki-67的水平呈正相关性。结论肾癌中Notchl和PI3K/Akt信号通路存在交互通话,共同参与调控肿瘤细胞的增殖。该发现提供了一种可能的肾透明细胞癌发生的新机制和潜在分子药靶。第二部分：利用NY-ESO-1蛋白与树突细胞之间的相互作用增强全细胞肾癌疫苗疗效的实验研究目的NY-ESO-1蛋白是一种免疫原性很强的肿瘤-睾丸抗原。我们发现NY-ESO-1可以与树突细胞表面的CRT-TLR4结合,促进树突细胞的成熟,而发挥内源性的免疫佐剂的功能。本研究中,我们试图利用NY-ESO-1蛋白与树突细胞之间的这种相互作用,来增强全细胞肾癌疫苗疗效。方法我们用基因工程的方法将NY-ESO-1蛋白表达于Renca细胞的表面。在此基础上,我们检测细胞膜定位的NY-ESO-1对肿瘤免疫原性、树突细胞的活化和肿瘤特异性的细胞免疫应答的影响。我们将这种改装过的Renca细胞制成疫苗,检测对荷瘤小鼠的治疗效果和对抑制性肿瘤免疫微环境的影响。结果细胞膜定位的NY-ESO-1可以抑制Renca细胞在BALB/c小鼠体内的生长速度,但并不影响Renca细胞在体外的增殖速度。细胞膜定位的NY-ESO-1蛋白可以充分地和固有免疫系统相接触,有效地协助肿瘤细胞活化树突细胞,诱发小鼠产生抗肿瘤的CD8+T淋巴细胞免疫反应。当用作治疗性疫苗时,细胞膜定位的NY-ESO-1蛋白可以介导更强的免疫反应,来抑制肿瘤的生长和转移；同时还可以减少荷瘤小鼠体内的抑制性免疫细胞MDSC和Treg。结论NY-ESO-1蛋白具有肿瘤-睾丸抗原和免疫调节佐剂的双重角色。NY-ESO-1与TLR4受体的结合可以促进树突细胞的活化。应用基因工程的方法,将NY-ESO-1蛋白定位于细胞膜上可以通过提高抗肿瘤的细胞免疫应答和缓解抑制性的肿瘤免疫微环境,增强全细胞肿瘤疫苗的治疗效果。因此,我们的实验结果为肿瘤疫苗或者免疫治疗提供了可能的新方法。
【作者】许乐；
【导师】林宗明；
【作者基本信息】复旦大学，外科学，2013，博士
【关键词】肾癌；Notchl信号通路；PI3K/Akt信号通路；增殖；NY-ESO-1；树突细胞；肿瘤细胞疫苗；

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