过表达Twist基因诱导肺腺癌NCI-H1299细胞EMT及其对增殖、迁移及侵袭能力的影响

【摘要】目的：上皮一间质转化(epithelial-mesenchymaltransitions,EMT)是指上皮细胞在一些因素的作用下,失去极性及细胞间紧密连接和黏附连接,获得了浸润性和游走迁移能力,变成具备间质细胞形态和特性的细胞。上皮表型的丧失和间质特性的获得是EMT发生的主要特征,这种表型的转化使肿瘤细胞摆脱细胞间黏附,从而表现得更具侵袭和转移能力。Twist最初被认为是一种在胚胎发育中起关键调控作用的转录因子,广泛参与调控器官生长发育、肿瘤发生、细胞增殖分化等过程,其表达上调可能促进细胞表型向恶性转化,可能是某些恶性肿瘤发生、发展的关键因素。。Twist能够直接诱导EMT,并能间接地影响其他的EMT转录调控因子。本实验通过上调Twist基因,诱导人肺腺癌NCI-H1299细胞发生EMT,并观察其对肿瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法：通过携带有Twist1基因的腺病毒液和阴性病毒液分别感染人肺腺癌NCI-H1299细胞,分为感染组、对照组和空白对照组,观察其形态学改变；qPCR检测5个目的基因：Twist1、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和Fibronectin的表达情况；WesternBlot检测5个蛋白：Twistl、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和Fibronectin的表达情况；然后以CCK-8实验绘制细胞生长曲线,细胞划痕实验观察其迁移能力,Transwell实验检测其侵袭能力。结果：1.携带有Twist1基因的腺病毒液成功感染NCI-H1299细胞。2.感染后qPCR检测,感染组Twist1、N-cadherin、Vimentin和Fibronectin的表达高于对照组,E-cadherin表达与对照组无明显区别。3.感染后WesternBlot检测,感染组Twist、N-cadherin、Vimentin和Fibronectin蛋白的含量高于对照组,E-cadherin则低于对照组。4.CCK-8实验绘制细胞生长曲线,感染组增殖速度慢于对照组,并具有统计学意义。5.细胞划痕实验,感染组迁移细胞数多于对照组。6.Transwell实验,感染组迁移值高于对照组,并具有统计学意义。结论：1.过表达Twist基因能诱导人肺腺癌NCI-H1299细胞发生EMT。2.过表达Twist基因使NCI-H1299细胞E-cadherin表达下降,而与间质细胞相关的基因和蛋白表达增强。3.过表达Twist基因使NCI-H1299细胞的增殖能力减弱。4.过表达Twist基因能增强NCI-H1299细胞的迁移能力。5.过表达Twist基因能增强NCI-H1299细胞的侵袭能力。
【作者】沈啸；
【导师】王群；
【作者基本信息】复旦大学，临床医学（专业学位），2013，博士
【关键词】Twist基因；NCI-H1299细胞；腺病毒感染；qPCR；WesternBlot；CCK-8；Transwell；

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