Caspase-3小干扰RNA在猪自体肾移植模型中对供肾的保护作用及机制研究

【摘要】目的：探索裸露的Caspase-3小干扰RNA在猪自体肾移植模型中对供肾的保护作用及机制。方法：建立猪自体肾移植模型,切取左侧肾脏4℃冷保存24h作为供肾,次日切除右肾后原位移植。(1)首先仅供肾局部给予0.3mg短效的裸露AmbionSilencerSelectCaspase-3siRNA(n=6),通过组织病理学、肾功能、Caspase-3mRNA和蛋白表达、凋亡和炎症细胞数量评价短效siRNA在冷保存后及移植后2d对供肾的保护效应,同时应用荧光标记的siRNA追踪其在体内的代谢与分布。(2)随后使用长效的血清稳定型Caspase-3siRNA,供肾局部给予0.3mg,在移植前全身给予0.9mg,同时使用等量NegativesiRNA做阴性对照(n=5),在冷保存后及移植后2周评价其对供肾的保护作用及siRNA潜在的毒性。检测指标包括组织及外周血白细胞Caspase-3mRNA表达、组织Caspase-3蛋白表达、凋亡和炎症细胞数量、炎症因子和转录因子mRNA水平、HMGB1、TLR3、TLR7蛋白表达、组织病理学及肾功能。结果：(1)Caspase-3siRNA在冷保存后被肾脏细胞所摄取,但在移植后2d肾脏内表达降低。在短效Caspase-3siRNA治疗组的冷保存供肾中,Caspase-3mRNA和32kD前体蛋白表达显著下降,但是在移植后2d肾脏中,Caspase-3mRNA和17kD激活亚单位蛋白表达显著上升,并且活性Caspase-3+细胞、凋亡细胞及MPO+细胞均明显增加,组织损伤加重,肾功能无明显变化。(2)使用长效的血清稳定型Caspase-3siRNA治疗后,无论是在冷保存后还是移植后2周的肾脏,Caspase-3mRNA和蛋白表达、凋亡和MPO+细胞数量、IL-1β、IL-6、NF-κB、IFN-α、IFN-β、IFN-γmRNA表达及HMGB1蛋白表达均显著降低,TLR3和TLR7蛋白表达无明显变化,组织损伤减轻,肾功能明显改善。结论：(1)短效的裸露Caspase-3siRNA供肾内局部给药可有效减轻24h冷保存后的细胞凋亡,但不能保护术后2d的移植肾,可能由于短效siRNA的不稳定及局部治疗的不足所引起；(2)长效的血清稳定型裸露Caspase-3siRNA供肾内局部给药及移植前全身给药不仅能保护冷保存后的供肾,还能有效保护术后2周的移植肾；(3)新型的血清稳定型Caspase-3siRNA并不引起TLR依赖的固有免疫反应,无明显副作用。
【作者】杨橙；
【导师】朱同玉；杨斌；
【作者基本信息】复旦大学，外科学，2013，博士
【关键词】Caspase-3小干扰RNA；肾脏缺血再灌注损伤；细胞凋亡；炎症；

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