新疆高风险遗传性乳腺癌BRCA1/2基因突变、启动子甲基化检测及相关因素分析研究

【摘要】目的：(1)通过对新疆82例高风险遗传性乳腺癌BRCA1/2基因突变检测,了解新疆高风险遗传性乳腺癌BRCA1/2基因突变位点及携带情况。探讨不同遗传背景下BRCA1/2基因突变的情况；探讨BRCA1/2基因突变情况与临床病理特征之间的联系；(2)通过对BRCA基因未突变的74例高风险遗传性乳腺癌新鲜冷冻组织检测BRCA1/2基因启动子甲基化状态,了解遗传性乳腺癌BRCA1/2启动子甲基化情况；探讨BRCA1/2启动子甲基化状态与临床病理特征之间的联系。(3)了解影响新疆82例高风险遗传性乳腺癌BRCA1/2基因突变者与BRCA1/2基因未突变者生存情况的因素；了解影响74例高风险遗传性乳腺癌BRCA1/2基因启动子区甲基化与未甲基化患者生存情况的因素。方法：(1)以来自新疆地区的82例符合高风险遗传性乳腺癌标准的患者为研究对象,通过外周静脉血提取基因组DNA,对BRCA1/2基因的全部编码序列进行扩增。BRCA1/2基因突变分析由变性高效液相色谱分析(DHPLC)进行预筛,结果进行DNA测序证实。应用SPSS16.0统计软件包对数据进行统计学分析。计数资料采用卡方检验。等级资料采用秩和检验。以P<0.05为差异有统计学意义。比较BRCA1/2基因突变情况以及两组之间的临床病理特征。(2)从液氮冷藏组织中提取基因组,用亚硫酸氢钠修饰样品DNA,以修饰过的样品DNA为模板,分别用非甲基化特异性引物和甲基化特异性引物进行PCR扩增。扩增产物在2%琼脂糖凝胶电泳中观察结果。运用统计软件SPSS16.0中的卡方检验,比较BRCA1甲基化组与BRCA2甲基化组之间的甲基化检出率；用卡方检验比较两组之间的临床病理特征。(3)收集82例患者的临床病理资料(年龄、遗传背景、肿瘤大小、腋窝淋巴结转移情况、分子亚型、肿瘤细胞分级、临床分期、BRCA突变、BRCA甲基化状态、生存时间),应用COX回归模型分析影响生存时间的多种变量。结果：(1)82例高风险遗传性乳腺癌,共发现8例BRCA基因突变(8/82,9.76%),其中BRCA1突变4例,BRCA2突变4例；4例BRCA突变(2073delA移码突变、W372X无义突变、6873delCTCC移码突变、9481delA移码突变),在BIC数据库中未见报道。另外4例突变(Q759X无义突变、IVS16+1G＞A拼接点突变、K467X无义突变、3036delA移码突变)在BIC数据库中可见报道。5例BRCA基因突变发生在11号外显子(5/8,62.5%),5例移码突变,3例无义突变；4例患者具有家族史。在三阴性乳腺癌BRCA基因突变检测中,发现5例BRCA基因发生致病性突变(5/30,16.7%)；其中BRCA1突变率高(4/30,13.3%)。三阴性乳腺癌BRCA基因突变者与未突变者相比,突变者临床病理分期早(P=0.04),预后较好。(2)本研究全部74例BRCA基因突变检测阴性者中共发现24例BRCA1/2基因启动子甲基化,甲基化率33.78%(24/74)；发现乳腺癌组织中BRCA1基因启动子CpG岛甲基化阳性者19例,甲基化率为25.67%(19/74)。发现乳腺癌组织中BRCA2基因启动子CpG岛甲基化阳性者5例,甲基化率为6.76%(5/74)。BRCA1甲基化阳性率与BRCA2甲基化阳性率之间差异有统计学意义(P=0.002)；BRCA1/2基因启动子甲基化组与非甲基化组的临床病理特征在年龄、民族、肿瘤大小、腋窝淋巴结转移情况、临床分期、肿瘤组织分级和分子分型方面的差异无统计学意义(P>0.05),在分子分型方面差异有统计学意义(P=0.003),三阴性乳腺癌BRCA基因启动子甲基化阳性率高40%(10/25)。(3)对82例遗传性乳腺癌生存率有影响的因素是临床分期和肿瘤分子分型,两者都是危险因素。调整临床分期后,分子分型为Her-2过表达型的遗传性乳腺癌术后死亡风险将增大到13.195倍,增加12.195倍；调整分子分型后,临床分期每增加Ⅰ期,遗传性乳腺癌术后死亡风险将增大到25.924倍,增加24.924倍。BRCA基因突变组患者与BRCA基因未突变组相比生存率降低,生存时间缩短。对BRCA基因未突变的74例遗传性乳腺癌生存率有影响的因素是临床分期和肿瘤分子分型。调整临床分期后,分子分型为Her-2过表达型的遗传性乳腺癌术后死亡风险将增大到14.431倍,增加13.431倍；调整分子分型后,临床分期每增加Ⅰ期,遗传性乳腺癌术后死亡风险将增大到24.824倍,增加23.824倍。BRCA1基因启动子甲基化患者生存率高于BRCA1基因启动子未甲基化患者；BRCA2基因启动子甲基化患者生存率低于BRCA2基因启动子未甲基化患者;BRCA1/2基因启动子甲基化患者生存率40个月之前高于BRCA1/2基因启动子未甲基化患者,但是在40个月之后生存率低于BRCA1/2基因启动子未甲基化患者。结论(1)在新疆多民族地区BRCA基因突变位点可能与国内其他地区不同；高风险三阴性乳腺癌BRCA1基因突变率高,对于高风险三阴性乳腺癌患者应进行BRCA基因检测；高风险三阴性乳腺癌BRCA基因突变者与未突变者相比,可能在临床病理特征及预后方面存在差异,应考虑个体化治疗。(2)在新疆高风险遗传性乳腺癌中BRCA1基因启动子甲基化率高；在乳腺癌四种分子分型中三阴性乳腺癌的BRCA基因启动子甲基化率高。(3)遗传性乳腺癌中分子分型为Her-2过表达型的患者预后差；遗传性乳腺癌中临床分期晚的患者预后差；早期诊断遗传性乳腺癌可以延长手术后生存期；BRCA1启动子甲基化和BRCA2启动子甲基化对遗传性乳腺癌生存率的影响不同。
【作者】吴涛；
【导师】倪多；
【作者基本信息】新疆医科大学，外科学（专业学位），2013，博士
【关键词】BRCA1/2基因；遗传变异；启动子甲基化；预后；COX回归；

【参考文献】
[1]方流.描述逻辑推理优化技术研究[D].浙江大学,2008.
[2]张利.基于西门子PLC技术的污水处理厂控制系统设计与实现[D].西安电子科技大学,控制工程,2012,硕士.
[3]岳鑫.新疆精河县阿勒坦金锑矿床地质地球化学特征[D].中国地质大学（北京）,地质工程,2014,硕士.
[4]康林萍,付青峰,曹美容.金刚石体积分数对金刚石/铜复合散热材料相关性能的影响[J].热处理技术与装备,2014,04:10-14.
[5]王晓红.丹参酮、血塞通对TNF-α诱导AQP4表达的影响及其机制研究[D].北京中医药大学,中西医结合临床,2013,硕士.
[6]俞迎霞.锂离子电池负极材料Co_3O_4的性能改善及导电剂优化研究[D].浙江大学,材料工程,2013,硕士.
[7]杨明华.奇异矩阵束的标准形与广义逆[D].哈尔滨工业大学,基础数学,2013,硕士.
[8]孙慧清.早产儿主要严重并发症防治措施研究[D].郑州大学,儿科学,2014,博士.
[9]黄坤.排舞在邯郸市城市社区推广对策的研究[D].山东体育学院,体育教学,2012,硕士.
[10]刘玲玲.未成年人致害侵权责任研究[D].河北经贸大学,民商法,2013,硕士.
[11]都颖,陈海杰,成中军,来华,张乃庆,孙克宁.分子自组装法制备具有可控浸润性的铜表面[J].高等学校化学学报,2014,01:105-109.
[12]鲁垠涛,姚宏.环境科学类大学生创新实验存在的不足及建议[J].中国现代教育装备,2014,11:85-87.
[13]王宏明.过程控制半实物仿真试验系统的研究与应用[D].河北工业大学,控制理论与控制工程,2004,硕士.
[14]汪洋.复杂网络的社团发现算法研究[D].安徽大学,计算机应用技术,2014,硕士.
[15]马翱慧.MODIS海洋叶绿素浓度产品缺失数据重构方法研究[D].中国地质大学（北京）,地图制图学与地理信息工程,2013,硕士.
[16]黄毛毛.我国集体合同争议调整模式的选择与实施[D].南京师范大学,经济法学,2012,硕士.
[17]张静.化学计量学在食品防腐剂中的应用研究[D].浙江海洋学院,农业推广（专业学位）,2014,硕士.
[18]刘家磊.论刑事证据的性质[D].安徽大学,诉讼法学,2013,硕士.
[19]李倩琴.吉非替尼治疗伴有EGFR基因突变的非小细胞肺癌的综合分析[D].南方医科大学,肿瘤学,2012,硕士.
[20]杨晓伟,何雨石,廖小珍,马紫峰.减少再堆叠改性的石墨烯薄膜在锂离子电池中的应用(英文)[J].物理化学学报,2011,11:2583-2586.
[21]孙龙.潜孔锤及声波钻柔体振动冲击的理论与建模[D].中国地质大学（北京）,机械工程,2014,硕士.
[22]杨阳.UHF RFID标签天线设计理论研究与应用[D].兰州理工大学,电子与通信工程,2014,硕士.
[23]丁静.基于群组层次分析法的配送中心配送绩效评价的研究[D].合肥工业大学,管理科学与工程,2004,硕士.
[24]孙健.基于衔接理论的英语国家留学生词汇衔接偏误研究[D].山东大学,汉语国际教育（专业学位）,2012,硕士.
[25]苏庆国,娄德兰.矿山高边坡剥岩洞室控制爆破[J].铁道建筑技术.1994(04)
[26]张吉林.交大房产未来期项目的市场营销策略研究[D].西南交通大学,工商管理,2003,硕士.
[27]罗冬莲.我国上市公司“影子董事”制度研究[D].北京交通大学,2014.
[28]邱明甲.我国出入境检验检疫机构进出口商品检验职能研究[D].河北师范大学,公共管理,2014,硕士.
[29]杨佳.血管加压素受体V_2、V_3在ACTH分泌性肿瘤上的表达及功能[D].复旦大学,临床医学（专业学位）,2013,博士.
[30]徐正和.发展中的上海城市快速轨道交通[J].现代城市轨道交通.2004(01)
[31]刘健康,何国柱.H_2O分子在石墨烯扶手型边缘吸附的研究[J].四川大学学报(自然科学版),2012,03:635-638.
[32]赵小艳.从“心安”看孔子哲学人之为人的精神自觉[D].兰州大学,中国哲学,2013,硕士.
[33]曲剑舒.试论《人与鼠》[D].东北师范大学,比较文学与世界文学,2012,硕士.
[34]刘刚.基于网络处理器的千兆防火墙设计与实现[D].东华大学,计算机应用技术,2004,硕士.
[35]李恩新.激光针灸的远程作用机理研究[D].曲阜师范大学,物理电子学,2004,硕士.
[36]王欣.利用图象的估计值平滑噪声的一种方法[J].自动化学报,1988,02:155-158.
[37]王昕煜.老子环境思想评述[D].辽宁师范大学,专门史,2003,硕士.
[38]刘明松,张伯明,姚良忠,孙宏斌,吴文传.基于PMU和改进戴维南等值模型的电压稳定在线监视[J].电力系统自动化,2009,10:6-10.
[39]张龙华.等离子熔敷MoSi_2+TiC增强耐磨抗高温氧化复合材料涂层组织及性能研究[D].北京交通大学,2015.
[40]赵龙海.六足步行机器人自然地形下全方位运动规划策略研究[D].哈尔滨工业大学,机械电子工程,2013,硕士.
[41]郭亚军.一类复杂经济系统的建模方法与应用[J].控制与决策,1995,02:167-169.
[42]陈东辉,翟秋阁.聚谷氨酸/多壁碳纳米管修饰玻碳电极测定扑热息痛[J].信阳师范学院学报(自然科学版),2014,02:243-246.
[43]潘舰.负载型ZnO/α-Fe_2O_3光催化降解印染废水的研究[D].兰州理工大学,应用化学,2013,硕士.
[44]王中强.天然乳铁蛋白和重组乳铁蛋白的体内、体外抗菌效果及机理研究[D].浙江大学,2004.
[45]陈妍妍.风险社会视野下城市网络舆情管理及应对研究[D].华中科技大学,传播学,2013,硕士.
[46]莫江明,彭少麟,SandraBROWN,方运霆,孔国辉.鼎湖山马尾松林植物养分积累动态及其对人为干扰的响应[J].植物生态学报,2004,06:810-822.
[47]白媛.A Study on the Influence of Concreteness Effect and Task Difference in L2Vocabulary Acquisition[D].西安外国语大学,外国语言学及应用语言学,2014,硕士.
[48]卢进军.基于ZigBee的仓储监测系统的设计[D].西安电子科技大学,计算机应用技术,2011,硕士.
[49]王亚韡,王宝盛,傅建捷,阮挺,曲广波,汪畅,曾力希,刘倩,袁博,江桂斌.新型有机污染物研究进展[J].化学通报,2013,01:3-14.
[50]王志强.树立可持续发展理念搞好城市污水处理[D].西北工业大学,马克思主义理论与思想政治教育,2004,硕士.