GGCX在新疆地区人群中的基因多态性及其对华法林剂量的影响

【摘要】目的：(1)了解γ-谷氨酰基羧化酶(Gamma-glutamylcarboxylase,GGCX)基因多态位点在新疆地区哈萨克族、汉族人群中分布、特点及比较两个民族之间的差异；(2)探讨GGCXrs6751560多态性与新疆地区哈萨克族、汉族人群房颤的关系；(3)分析及比较新疆地区房颤人群GGCXrs259251、rs762684、rs11676382和rs6751560多态性对华法林剂量的影响。方法：(1)标准酚-氯仿法提取新疆地区哈萨克、汉族各305例健康人外周血基因组DNA,应用多聚酶链反应-限制性内切酶长度片段多态性(PCR-RFLP)技术对GGCX的两个单核苷酸位点(分别为：rs11676382,rs6751560,rs762684和rs259251)进行基因多态性监测,计算其基因型,并在两个民族之间基因多态性分布进行比较；(2)采用直接测序的方法对GGCX基因rs6751560位点,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法,对305例哈萨克族房颤患者与305例汉族房颤患者GGCX基因rs6751560多态性进行监测及比较；(3)采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性和直接测序的方法,对269例服用华法林的房颤患者的rs259251、rs762684、rs11676382和rs6751560位点进行检测,统计分析不同基因型对华法林剂量的影响和比较不同民族之间的差异。结果：(1)经PCR扩增后GGCXrs11676382位点基因目的片段大小为283bp,rs6751560位点基因目的片段大小为304bp,rs762684的PCR扩增产物长度为609bp,rs2592551的PCR扩增产物长度为381bp；酶切后：rs11676382位点基因型有3种：野生型CC,杂合型CG和突变型GG;rs6751560位点基因型有3种：野生型AA,杂合型AG和突变型GG;rs762684和rs2592551位点基因型有3种：野生型CC,杂合型CT和突变型TT;(2)rs11676382基因型CC、CG和GG在哈萨克族人群中分别有66例(21.64%)、233例(76.39%)和6例(1.97%),C和G等位基因的频率分别为59.84%和83.50%,在汉族人群中分别有209例(68.30%)、93例(30.39%)和4例(1.31%),C和G等位基因的频率分别为40.16%和16.50%；rs6751560基因型在哈萨克族人群中AA、AG和GG分别有2例(0.66%)、11例(3.61%)和292例(95.74%),A和G等位基因的频率分别为2.46%和97.54%,在汉族人群中AA、AG和GG分别有4例(1.31%)、3例(0.98%)和298例(97.70%),A和G等位基因的频率分别为1.80%和98.20%；rs762684基因型CC、CT和TT在哈萨克族人群中分别有125例(40.98%)、147例(40.20%)和33例(10.82%),C和T等位基因的频率分别为65.08%和34.92%,在汉族人群中分别有167例54.75%、112例(36.72%)和26例(8.52%),C和T等位基因的频率分别为73.11%和26.89%；rs2592551基因型CC、CT和TT在哈萨克族人群中分别有121例(39.67%)、130例(42.62%)和54例(17.70%),C和T等位基因的频率分别为60.98%和39.02%,在汉族人群中分别有154例(50.49%)、128例(41.97%)和23例(7.54%),C和T等位基因的频率分别为71.48%和28.52%；(3)新疆地区哈萨克族与汉族rs11676382位点进行比较rs11676382位点基因型比较总x2=134.88,P<0.01,进一步行显性模型CC与CG+GG比较,x2=134.4,P<0.01(差异有统计学意义),附加模型CG与CC+GG的比较,x2=129.88,P<0.01(差异有统计学意义),等位基因C与G比较,x2=84.26,P<0.01(差异有统计学意义)；隐性模型GG与CC+CG比较,x2=0.42,P=0.54(差异无统计学意义)；rs6751560基因型及等位基因型及基因频率比较差异均无统计学意义；新疆地区哈萨克族与汉族rs762684位点进行比较,总x2=11.60,P<0.05,进一步行基因型显性模型CC与CT+TT比较,x2=11.59,P<0.05(差异有统计学意义),隐性模型TT与CC+CT比较,x2=0.92,P=0.41(差异无统计学意义),附加模型CT与CC+TT比较,x2=8.22,P<0.05(差异有统计学意义)；等位基因C与T比较,x2=9.22,P<0.05(差异有统计学意义)；rs2592551位点进行比较,经x2检验总x2=16.46,P<0.01,进一步行基因型显性模型CC与CT+TT比较,x2=7.21,P<0.05(差异有统计学意义),隐性模型TT与CC+CT比较x2=14,28,P<0.01(差异有统计学意义),附加模型CT与CC+TT比较,x2=0.03,P=0.94(差异无统计学意义)；等位基因C与T比较,x2=15.01,P<0.01(差异有统计学意义)；(4)哈萨克族AF组突变型GG及杂合型AG的频率(44.9%,44.6%)高于汉族AF组,2组比较差异有统计学意义(x2=12.36,P<0.05)。A组的G等位基因频率(67.2%)也高于汉族AF组,2组之间差异有统计学意义(x2=144.19,P<0.01)。进一步行三个模型的比较,x2值和P值分别为,显性模型23.39,P<0.000,隐性模型4.45,P<0.05(差异有统计学意义),附加模型0.08,P>0.05(差异无统计学意义)。在调整了年龄、性别、吸烟、饮酒、身高、体重、BMI等混杂因素后GGCX基因rs6751560位点多态性、高血压、冠心病、糖尿病是房颤的危险因素(均P<0.01,OR值分别4.24、11.83、3.59、4.90,95%C1分别是2.63-6.83、6.92-20.23、2.29-5.64、3.07-7.79);(5)rs2592551基因多态性检测结果为野生纯合子CC型136例(50.56%),杂合子CT型115例(42.75%),突变纯合子TT型18例(6.69%)；等位基因频率C71.93%,T28.07%。CC型患者华法林的平均稳定剂量为(2.86±0.61)mg/d,CT型为(3.59±0.93)mg/d,TT型为(4.06±0.88)mg/d；rs762684基因多态性检测结果为野生纯合子CC型129例(47.96%),杂合子CT型110例(40.89%),突变纯合子TT型30例(11.15%)；等位基因频率C68.40%,T31.60%。CC型患者华法林的平均稳定剂量为(2.77±0.67)mg/d,CT型为(3.26±0.80)mg/,TT型为(3.65±1.0)mg/d,以上两个位点各组间华法林剂量比较,CC和TT,CC和CT间差异有统计学意义(P<0.05),而TT和CT间差异无统计学意义；rs1676382基因多态性检测结果为野生纯合子CC型115例(42.75%),杂合子CG型119例(47.96%),突变纯合子GG型25例(9.29%)；等位基因频率C66.73%,G33.27%。CC型患者华法林的平均稳定剂量为(2.55±0.42)mg/d,CG型为(3.12±0.71)mg/,GG型为(3.92±0.86)mg/d；本位点各组间华法林剂量比较,CC和GG,CC和CG间差异有统计学意义(P<0.05),而CG和GG间差异无统计学意义。rs6751560基因多态性检测结果为野生纯合子AA型101例(37.55%),杂合子AG型127例(47.21%),突变纯合子GG型41例(15.24%)；等位基因频率A61.15%,G38.85%。AA型患者华法林的平均稳定剂量为(2.38±0.61)mg/d,AG型为(3.41±0.98)mg/d,GG型为(4.02±0.89)mg/d；本位点各组间华法林剂量比较,AA和GG,AA和AG间差异有统计学意义(P<0.05),而AG和GG间差异无统计学意义；(6)少数民族和汉族人群GGCX基因rs11676382、6751560、762684、2592551位点基因型频率和等位基因频率比较结果：以上四个位点在服用华法林的少数民族和汉族房颤患者间进行基因型频率和等位基因频率比较,rs6751560位点显性模型、阴性模型和等位基因频率比较和rs11676382的等位基因频率比较在两组之间差异有统计学意义(P<0.000):rsrs6751560附加模型和rs11676382.rs762684.rs2592551各基因型和等位基因频率在两组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论：(1)新疆地区哈萨克族与汉族rs11676382位点多态性研究,两个民族均CC和CG基因型比较常见,C等位基因出现的频率比G等位基因出现的频率高；CC基因型是保护因素,而CG基因型是危险因素,GG基因型既不是保护因素,又不是危险因素；(2)rs6751560位点显示：两个民族中GG基因型常见,A和G等位基因出现的频率相等；(3)rs762684位点显示：两个民族中CC和CT基因型比较常见,C等位基因出现的频率比T等位基因出现的频率高；CC基因型是保护因素,而CT基因型是危险因素,TT基因型既不是保护因素,又不是危险因素；(4)rs2592551位点显示：两个民族中CC和CT基因型比较常见,C等位基因出现的频率比T等位基因出现的频率高；CC基因型是保护因素,而TT基因型是危险因素,CT基因型既不是保护因素,又不是危险因素；(5)GGCX基因(rs6751560位点)多态性与在新疆地区哈萨克族、汉族房颤患者中具有相关性GG基因型可能增加房颤发生的风险即GG基因型携带者发生房颤的危险性显著增加；(6)本研究显示新疆地区房颤人群GGCX基因rs259251、rs762684位点,排除其他影响华法林药效因素的情况下,根据基因型不同,所需要的华法林剂量有差异,以上两个位点TT基因型所需华法林剂量均较明显高于CC基因型,即完全突变基因型比野生纯合子基因型需要更多的华法林；而CT和TT基因型所需要的华法林药物剂量无显著差异,即杂合子(部分突变)基因型与完全突变基因型所需华法林剂量无明显差异；rs11676382位点,GG基因型所需华法林剂量均较明显高于CC基因型,即完全突变基因型比野生纯合子基因型需要更多的华法林。而CG和GG基因型所需要的华法林药物剂量无显著差异,即杂合子(部分突变)基因型与完全突变基因型所需华法林剂量无明显差异；rs6751560,GG基因型所需华法林剂量均较明显高于AA基因型,即完全突变基因型比野生纯合子基因型需要更多的华法林。而AG和GG基因型所需要的华法林药物剂量无显著差异,即杂合子(部分突变)基因型与完全突变基因型所需华法林剂量无明显差异；(7)rs6751560位点显性模型、阴性模型及A、G等位基因和rs11676382C和G等位基因在少数民族房颤患者中血INR值稳定在1.8-3.0之间所需要的华法林剂量高于汉族房颤患者,而rs6751560附加模型和rs11676382各基因型、rs762684和rs2592551各基因型和等位基因所需要的华法林剂量在两组之间无显著差异。
【作者】夏依扎·卡玛力；
【导师】木胡牙提；
【作者基本信息】新疆医科大学，内科学（专业学位），2014，博士
【关键词】γ-谷氨酰基羧化酶；基因多态性；房颤；华法林；

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