白羊草NAC转录因子基因的克隆、表达分析及遗传转化

【摘要】NAC(NAM,ATAF,CUC)是近十多年发现的一类植物特有的转录因子家族,参与植物的生长发育、衰老、次生代谢、激素调节和抗逆胁迫等生命活动过程。NAC转录因子最大的结构特征是N端含有约150个氨基酸残基组成的高度保守的NAC结构域。白羊草是一种优质的饲用牧草,本论文研究了NAC转录因子基因的克隆以及表达特性分析,并通过转基因技术获得转基因植株,为探讨和改良牧草对非生物胁迫的耐受性提供了理论依据和技术保障。研究结果如下：1.采用RACE的克隆方法,从白羊草中克隆到一个NAC转录因子基因,将其命名为BiNAC,并在Genbank中登录KF030136。具有1125bp的ORF区,编码由374个氨基酸组成的蛋白质。2.序列分析表明：白羊草BiNAC基因包含2个外显子和1个内含子,具有NAC类转录因子所特有的典型结构特征,与其它已知的NAC类转录因子基因在保守的结构域处具有很高的同源性。进化树分析表明,该蛋白属于ATAF亚族,与高粱的亲缘关系最近,同源性达到94%。3.采用实时荧光定量PCR的方法,分析了BiNAC基因在白羊草不同组织中的表达特异性,结果表明：白羊草BiNAC基因在三种组织中的表达存在差异性,在茎中表达最强,根中表达最弱。4.通过实时荧光定量PCR分析了BiNAC基因在逆境胁迫下的表达特性。实验结果表明：BiNAC基因在白羊草中能够被NaCl以及外源植物激素ABA诱导,初步推测BiNAC基因可能参与了白羊草对逆境的防御反应。5.构建表达载体pCAMBIA1302-BiNAC-GFP,进行亚细胞定位研究,结果表明：pCAMBIA1302-BiNAC-GFP融合蛋白集中分布在细胞核中,而对照pCAMBIA1302在细胞核和细胞质中均有分布,证明了BiNAC基因具有核定位的特性。6.构建表达载体pCAMBIA1302-BiNAC-GFP和pBI121-BiNAC-GUS,通过农杆菌介导法转化拟南芥,获得了转BiNAC基因的拟南芥植株。对转基因拟南芥T1代植株进行PCR检测和RT-PCR鉴定。结果表明,BiNAC基因已整合到拟南芥基因组中,并在转录水平正常表达。
【作者】方志红；
【导师】董宽虎；
【作者基本信息】山西农业大学，饲料作物生产与利用，2013，博士
【关键词】白羊草；NAC转录因子；亚细胞定位；表达分析；遗传转化；

【参考文献】
[1]乔亚丽.基于物联网的备品备件管理系统的设计与实现[D].电子科技大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[2]万鑫.我国公共服务供给模式的改革与多元协调机制的建设[D].东北师范大学,政治学理论,2012,硕士.
[3]范译文.基建项目中资金使用和监管系统的设计与实现[D].电子科技大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[4]余云飞.苏北地质异常区土壤和作物重金属富集特征及产地环境安全风险评价[D].南京农业大学,农业推广,2011,硕士.
[5]万杰.生态翻译学视角下地方外宣汉英翻译研究[D].华中师范大学,外国语言学及应用语言学,2014,硕士.
[6]付强善.生物法去除制浆黑液中木聚糖的研究[D].南京林业大学,林产化学加工工程,2004,硕士.
[7]罗延财.戏曲电视剧“电视化”手法探究[D].山西师范大学,戏剧戏曲学,2013,硕士.
[8]许涛.玛曲县高寒人工草地植被群落和土壤特性研究[D].甘肃农业大学,草业科学,2013,硕士.
[9]刘永铭.纳米WC-10Co硬质合金刀具材料烧结技术研究[D].广西大学,机械制造及其自动化,2004,硕士.
[10]陈金雄,刘雄飞,王庆森.医院数据仓库的设计与实现[J].医疗卫生装备,2004,08:37-39.
[11]谢文彪,樊绍胜,樊晓平.一种可最优化计算特征规模的互信息特征提取[J].控制与决策,2009,12:1810-1815.
[12]王学明.分类方法在考核数据分析中的应用[J].宁夏大学学报(自然科学版),2005,04:327-328+335.
[13]刘沛芬.对荷花创作中形式美的思考[D].湖南师范大学,美术（专业学位）,2013,硕士.
[14]方勇.思想政治教育视域下马克思主义农民教育及新农村建设问题研究[D].西安科技大学,思想政治教育,2013,硕士.
[15]王海燕.基于神经网络的企业信用评级系统的设计与实现[D].西安电子科技大学,计算机技术,2010,硕士.
[16]周宝成.高速电主轴热—结构耦合分析[D].兰州理工大学,机械制造及其自动化,2013,硕士.
[17]李新霞.综合性公立医院护理人员岗位管理的研究[D].内蒙古大学,公共管理,2014,硕士.
[18]魏宝林.锡矿山粗颗粒水砂充填采矿方法试验研究—I.W.F.采矿方法[J].有色金属(矿山部分).1992(02)
[19]张国英,梁文阁.氧化石墨烯对SiO_2多孔陶瓷吸波性能的影响[J].化工学报,2013,07:2696-2700.
[20]张明.大沽河湿地保护存在的问题与对策研究[D].中国海洋大学,公共管理,2011,硕士.
[21]江畅.磁光控制原子系综中暗态极化子的布洛赫振荡[D].湖南师范大学,理论物理,2013,硕士.
[22]吕超贤,李欣然,户龙辉,尹丽,胡京.基于小波分频与双层模糊控制的多类型储能系统平滑策略[J].电力系统自动化,2015,02:21-29.
[23]桑立锋.动态贝叶斯网络及其在说话人识别中的应用[D].浙江大学,计算机应用技术,2004,硕士.
[24]孙欢欢.《视听表演北京条约》研究[D].浙江工商大学,国际法学,2013,硕士.
[25]王永利.基于FPGA的实时图像处理平台的研究与设计[D].东北大学,检测技术与自动化装置,2011,硕士.
[26]关键,陈云岭,孙海龙.火炮身管胀膛原因浅论[J].一重技术.2007(03)
[27]鲍新福,都志杰,王芳君.自调整比例因子模糊控制器[J].自动化学报,1987,02:129-133.
[28]梁明珠.新型社区社会资本对居民参与影响的实证研究[D].河北经贸大学,行政管理,2014,硕士.
[29]孙光辉.抗草铵膦转基因水稻向杂草稻和栽培稻的基因漂移及其田间除草剂施用技术研究[D].南京农业大学,植物学,2013,硕士.
[30]商执亿,劳奇成.低温冷风磨削加工高速钢试验研究[J].西安工业大学学报,2015,02:130-134.
[31]余珊珊.胎盘间充质干细胞对小鼠特应性皮炎样模型的影响及机制探讨[D].苏州大学,皮肤病与性病学,2014,硕士.
[32]张继远.成都市城乡教育一体化研究[D].西南交通大学,行政管理,2013,硕士.
[33]林辉.稠油油藏注蒸汽和气体复合开采技术研究[D].东北石油大学,油气田开发工程,2013,硕士.
[34]周宇.基于WUM的个性化智能推荐技术研究[D].浙江工业大学,2003.
[35]何鹏,徐立臻,庄晓青.模糊聚类在Web信息检索中的应用研究[J].计算机工程,2002,10:241-242+260.
[36]赵宏渊.高中数学教学中培养反思能力的理论与实践研究[D].西北师范大学,教育,2003,硕士.
[37]梅菊.领域工程方法在电子商务系统中的研究与应用[D].南京邮电大学,软件工程（专业学位）,2013,硕士.
[38]王亚兵.反铲液压挖掘机工作装置结构与性能一体化设计研究[D].重庆大学,机械设计及理论,2014,硕士.
[39]毕淼睿.某医院污水处理工艺设计研究[D].长安大学,建筑与土木工程（专业学位）,2014,硕士.
[40]郭留涛.具有临界增长的半线性椭圆型方程的多解问题[D].华中师范大学,应用数学,2013,硕士.
[41]陈雨晴.八门湾红树林小单孢菌科放线菌多样性[D].海南大学,微生物学,2014,硕士.
[42]陈雷.品牌视角下的非营利组织核心竞争力构建研究[D].广西师范大学,企业管理,2013,硕士.
[43]杜月辰.毫火针配合温和灸治疗腰痛的临床研究[D].北京中医药大学,中医学,2014,硕士.
[44]何友全.数据挖掘方法及其在电力系统故障诊断中的应用研究[D].西南交通大学,2004.
[45]李媛.中西医结合治疗Ⅲ期、Ⅳ期肺鳞癌125例回顾性研究[D].北京中医药大学,内科学,2013,硕士.
[46]田来.高中生考试焦虑、注意网络及情绪调节策略的关系研究[D].吉林大学,应用心理学,2013,硕士.
[47]孙丽.朝鲜使臣情报搜集研究[D].中国社会科学院研究生院,专门史,2014,硕士.
[48]臧芹.大肠湿热和寒湿阻遏型溃疡性结肠炎患者临床特点的比较性研究[D].北京中医药大学,中医内科学,2013,硕士.
[49]关星辰.我国商业银行网上银行业务发展对策研究[D].首都经济贸易大学,金融学,2014,硕士.
[50]闫巧,毛晓波,闫戈林.人工智能在入侵检测系统中的应用[J].计算机工程与应用,2002,20:56-59.