电针对ApoE~(-/-)小鼠LDLR和PPARγ表达的影响

【摘要】[目的]：观察针刺干预ApoE-/-小鼠后的主动脉窦斑块的形态和斑块部位LDLR、PPARY蛋白的表达变化、肝脏形态和肝脏细胞LDLR蛋白的表达变化以及各组小鼠间血浆氧化低密度脂蛋白和载脂蛋白B含量的差异,探讨针刺改善ApoE-/-小鼠主动脉窦动脉粥样硬化斑块病理因素的影响机制。[方法]：实验一：将6周龄38只ApoE-/-小鼠随机分成两组,高脂高胆固醇饮食组(HF组)34只,给予含21%脂肪、1.25%胆固醇的饲料喂养,中等脂肪饮食组(MF组)4只,给予含10%脂肪的饲料喂养。HF组因饲养不当死亡1只。14周后,从HF组中随机选择3只小鼠,将其与4只MF组小鼠全部处死,采集血浆,检测血脂含量；取主动脉窦,行常规苏木精-伊红(HE)染色、冰冻HE染色和油红0染色；取腹主动脉,行常规HE染色。上述动脉病理切片光镜下观察并判断造模是否成功,同时,比较不同脂肪和胆固醇含量饲料喂养后小鼠的Lee’s指数、肝体比、体脂比、血脂以及动脉病理切片的变化。实验二：将剩余30只20周龄HF组ApoE-/-小鼠随机分为10只药物对照组(F组)、10只针灸治疗组(A组)、10只模型对照组(M组),继续给予高脂高胆固醇饮食喂养。同时,将5只喂食普通饲料的C57BL/6J小鼠作为空白对照组(BC组)。药物对照组给予辛伐他汀灌胃治疗,40mg/kg.d,针灸治疗组给予针刺“内关、后三里(足三里)、三阴交、神门”治疗。治疗11周后,采集各组小鼠血浆检测血脂；检测各组小鼠血浆氧化低密度脂蛋白和载脂蛋白B含量；取小鼠主动脉窦,行HE染色观察各组小鼠主动脉窦斑块的形态变化,行免疫组化染色检测各组小鼠主动脉窦斑块部位PPARγ、LDLR表达的差异；取小鼠肝脏,行HE染色观察各组小鼠肝脏细胞的形态变化,行免疫组化染色检测各组小鼠肝脏LDLR表达的差异,行Westernblot法检测各组小鼠肝脏LDLR蛋白表达的差异。[结果]：实验一：1、MF组和HF组Lee’s指数、肝体比、体脂比检测结果：MF组的Lee’s指数、肝体比、体脂比的略高于HF组,但没有显著性差异。2、MF组和HF组血脂检测结果：MF组的血脂(总胆固醇TC、甘油三酯TG、高密度脂蛋白HDL-C、低密度脂蛋白LDL-C)浓度略高于HF组,但没有显著性差异。3、MF组和HF组主动脉窦切片检测结果：MF组和HF组主动脉窦有明显脂质斑块形成,斑块中有大量脂质沉积和泡沫细胞积聚,并出现大块坏死核和柳叶状的胆固醇结晶体,中膜内弹力纤维排列比较完整,MF组和HF组均处于纤维斑块的早期。4、MF组和HF组腹主动脉切片检测结果：MF组和HF组腹主动脉HE染色切片可见内膜无脂质斑块形成,MF组内弹力板迂曲形成腹动脉瘤实验二：1、M组、F组、A组、BC组Lee’s指数、肝体比、体脂比检测结果：A组的Lee’s指数、体脂比与M组相比较小,有显著差异(P<0.05,P<0.05),A组的肝体比小于与M组。2、M组、F组、A组、BC组血液检测结果：2.1M组、F组、A组、BC组血脂检测结果：M组、F组、A组TC、TG、LDL浓度高于BC组,均存在显著性差异(P<0.05)；M组、F组、A组之间各血脂成分浓度相近,不存在显著性差异。2.2M组、F组、A组、BC组血浆ApoB、OX-LDL检测结果：A组ApoB、ox-LDL含量明显低于M组,存在显著性差异(P<0.05)；BC组的ApoB、ox-LDL含量要显著低于其他各组。3、M组、F组、A组主动脉窦切片检测结果：3.1M组、F组、A组主动脉窦HE染色结果：A组主动脉窦斑块面积和斑块占血管百分比明显低于M组(P<0.05),A组主动脉窦斑块内膜单位视野内的细胞数明显高于M组(P<0.05),A组主动脉窦斑块中膜单位视野内的细胞数高于M组,A组主动脉窦血管中膜内胶原纤维层最大厚度大于M组(P<0.05),这表明针刺能够减少脂质斑块面积,抑制斑块内膜下细胞凋亡和坏死,抑制平滑肌细胞的迁移和胶原纤维的降解,明显抑制斑块的发展。3.2M组、F组、A组主动脉窦PPARγ免疫组化染色结果：A组主动脉窦斑块中膜单位视野内表达PPARγ蛋白的细胞数高于M组(P<0.05),表明针刺能够提高主动脉窦斑块内的PPARY蛋白的表达,抑制中膜内炎症的进展。3.3M组、F组、A组主动脉窦LDLR免疫组化染色结果：A组主动脉窦斑块内膜单位视野内表达LDLR蛋白的细胞数与M组无明显差异,表明针刺治疗对主动脉窦斑块内膜下LDLR蛋白的表达无明显影响。4、M组、F组、A组、BC组切片肝脏检测结果：4.1M组、F组、A组、BC组肝脏HE染色结果：A组肝脏肝腺泡3区的单位视野肝细胞数明显高于M组(P<0.05),A组肝脏肝腺泡3区的肝细胞内未出现M组肝细胞中出现的大颗粒脂滴,表明针刺抑制肝细胞的凋亡和坏死,针刺减少肝脏细胞内脂滴大小,减少脂肪变性等炎症状态。4.2M组、F组、A组、BC组肝脏LDLR免疫组化染色结果：A组肝脏肝腺泡3区的单位视野内表达LDLR蛋白的肝脏细胞数明显高于M组(P<0.05),表明针刺提高肝细胞LDLR蛋白表达。5、M组、F组、A组、BC组肝脏LDLR的蛋白质免疫印迹杂交(Westernblotting)结果：针刺后肝脏内细胞LDLR蛋白表达增高。[结论]针刺治疗能通过调节肝脏和血管内脂质和能量代谢、抗氧化、抗炎症、抑制血管平滑肌细胞迁移增殖、抑制血管斑块破裂、抑制肝脏细胞、平滑肌细胞、泡沫细胞等细胞的凋亡坏死等途径从而起到抑制动脉粥样斑块的发展的目的。
【作者】陶文剑；
【导师】艾炳蔚；
【作者基本信息】南京中医药大学，针灸推拿学，2014，博士
【关键词】动脉粥样硬化；PPARγ；LDLR；氧化低密度脂蛋白；主动脉窦斑块；针刺；

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