MiR-21通过PTEN/PI3K/AKT信号通路调控结直肠癌侵袭转移的机制研究

MiR-21通过PTEN/PI3K/AKT信号通路调控结直肠癌侵袭转移的机制研究

作者:师大云端图书馆 时间:2015-08-13 分类:期刊论文 喜欢:3829
师大云端图书馆

【摘要】第一部分MiR-21和PTEN/PI3K/AKT信号通路相关蛋白在结直肠癌中的表达及临床意义目的:探讨miR-21、PTEN/PI3K/AKT信号转导通路相关蛋白在结直肠癌(CRC)中的表达及临床意义。方法:应用实时荧光定量RT-PCR(real-timefluorescencequantitiveRT-PCR,realtimeFQ-PCR)检测结直肠癌组织中的miR-21表达水平,应用免疫组化(immunohistochemistry,IHC)SP法检测结直肠癌组织中PTEN、PI3K、AKT的表达水平。并探索他们之间的关系,以及与临床病理参数之间的相关性。结果:与癌旁正常组织比较,miR-21的表达水平明显增高(p<0.05),PTEN的表达水平明显降低(p<0.05),PI3K、AKT的表达水平均明显增高(p<0.05),miR-21、PTEN、PI3K、Akt表达与患者年龄、性别、肿瘤部位无关(P>0.05),与肿瘤分化程度、浸润深度、临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05)。miR-21与PTEN的表达之间呈负相关(r=-0.396,p<0.05);PTEN与PI3K蛋白阳性表达之间呈负相关(r=-0.354,P<0.05);PTEN与Akt蛋白阳性表达之间呈负相关(r=-0.365,P<0.05);PI3K与Akt蛋白阳性表达之间呈正相关(r=0.645,P<0.05)。结论:miR-21可通过抑制PTEN激活P13K/Akt信号通路,进而促进CRC的发生发展。第二部分miR-21在结直肠癌中负向调控PTEN的研究目的:探讨抑制microRNA-21(miR-21)表达对PI3K/PTEN/AKT/mTOR信号通路中各蛋白的影响及miR-21可能调控的靶基因。方法:通过反义寡核苷酸(anti-senseoligonucleotide,ASO)技术抑制结直肠癌细胞株HCT116中miR-21的表达并加以验证。通过蛋白质免疫印迹法(Westernblot,WB)检测HCT116细胞中PTEN、PI3K、Akt、MMP-9、mTOR表达的改变。利用生物信息学分析预测miRNA-21可能的靶基因,荧光素酶双报告基因实验检测PTEN活性。结果:miR-21在HCT116中表达最高,在SW480中表达最低。miRNA-21在细胞株HCT116中的表达得到有效抑制,PTENmRNA无明显变化。而PTEN蛋白的表达明显上调(P<0.05),PI3K、Akt、MMP-9、mTOR表达下调(P<0.05)。筛选并确认了PTEN为miR-21的调控靶基因之一。结论:PTEN可作为miR-21的靶基因参与调控CRC过程。miR-21在结直肠癌中表达增高,通过抑制PTEN表达促进肿瘤细胞侵袭转移。第三部分抑制miR-21表达对结肠癌HCT116细胞生物学行为的影响目的:探讨抑制miR-21表达对结肠癌HCT116细胞增殖、周期凋亡、侵袭和迁移等生物学行为的影响。方法:应用MTT(四甲基偶氮唑盐比色)法、克隆形成实验、流式细胞技术(FCM)、Transwell侵袭和迁移实验检测转染后HCT116细胞的增殖、克隆形成能力、周期、凋亡、侵袭、迁移;并用Westernblotting检测转染后HCT116细胞PTEN的表达,双荧光素酶报告实验检测转染后HCT116细胞PTEN的活性。结果:与阴性对照组(NC)、空白对照组(MOCK)比较,转染抑制组(IN)miR-21表达水平明显降低(p<0.05)。下调miR-21对结肠癌细胞株的增殖抑制作用明显(p<0.05);克隆形成能力下降(p<0.05);下调miR-21能增加结肠癌细胞株的凋亡(p<0.05);细胞G0/G1期的细胞明显增多(p<0.05),S期比例明显降低(p<0.05);Transwell实验证实miR-21下调后,结肠癌细胞侵袭(p<0.05)和迁移(p<0.05)能力明显下降;Western印迹实验显示,抑制miR-21表达后HCT116细胞株中PTEN蛋白表达明显增加(p<0.05),PTEN荧光素酶相对活性明显增加(p<0.05)。结论:miR-21可通过抑制PTEN进而调控结直肠癌细胞生物学行为。PTEN可能是miR-21的靶基因之一。
【作者】熊兵红;
【导师】张才全;
【作者基本信息】重庆医科大学,外科学,2014,博士
【关键词】结直肠癌;miR-21;PTEN;PI3K;AKT;信号通路;

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