RBFOX1高表达与皮质发育障碍伴难治性癫痫发病机制的临床及细胞学研究

RBFOX1高表达与皮质发育障碍伴难治性癫痫发病机制的临床及细胞学研究

作者:师大云端图书馆 时间:2015-08-13 分类:期刊论文 喜欢:1905
师大云端图书馆

【摘要】目的:探索皮质发育障碍伴难治性癫痫患者脑内病灶组织中RBFOX1蛋白的表达情况;采用慢病毒介导的Rbfox1基因过表达和沉默技术,建立离体培养的大鼠原代神经元Rbfox1基因过度表达与沉默模型,研究不同水平的Rbfox1蛋白对神经元兴奋性的影响及可能机制。方法:收集皮质发育障碍伴难治性癫痫患者脑内病灶组织(本实验取颞叶皮质为研究对象),对照组为重型颅脑外伤患者因颅内压高行内减压术切除的非挫伤区的颞叶皮质。采取免疫组化和Westernblot技术检测皮质发育障碍伴难治性癫痫患者脑内病灶组织中RBFOX1蛋白的表达情况。采取慢病毒介导的Rbfox1基因过表达和沉默技术制备原代神经元Rbfox1基因过表达与沉默模型,采用RT-qPCR技术、Westernblot技术和免疫荧光技术验证慢病毒转染效率。采用膜片钳技术检测Rbfox1基因表达改变后原代神经元的兴奋性改变。同时采用Westernblot技术和免疫荧光技术检测Rbfox1基因表达改变后原代神经元内Rbfox1蛋白的下游靶基因包括NMDA受体1(Grin1),GABA-A受体γ2(Gabrg2)和钠通道Na(v)1.6(Scn8a)基因表达的改变。结果:在皮质发育障碍伴难治性癫痫患者脑内病灶组织中,RBFOX1蛋白表达上调。膜片钳技术检测Rbfox1蛋白表达水平不同的神经元兴奋性时发现:1.Rbfox1过表达组的神经元动作电位幅度和钠电流密度值较Rbfox1沉默组、空病毒组以及对照组都显著增高,差异具有统计学意义。2.仅我们做膜片钳观察的有限时间内,我们发现26.32%的Rbfox1过表达组神经元出现了自发的、反复发生的癫痫样放电。3.Rbfox1沉默组的神经元也表现出类似的结果,但不及Rbfox1过表达组明显。Rbfox1过表达组神经元动作电位波幅比Rbfox1沉默组神经元增高近9mV,差异具有统计学意义(P<0.05,ANOVA继之以LSDtest);Rbfox1过表达组出现自发的癫痫样放电的神经元比例比Rbfox1沉默组增高约10%,癫痫样放电的频率也明显增高。4.一些与癫痫有关的Rbfox1蛋白的靶基因蛋白产物随着原代神经元内Rbfox1蛋白表达的改变(上调以及下调)而出现表达上调,包括NMDA受体1(Grin1),GABA-A受体γ2(Gabrg2)以及钠通道Na(v)1.6(Scn8a)。结论:1.皮质发育障碍伴难治性癫痫患者的脑内病灶组织中RBFOX1蛋白表达显著增高;过表达Rbfox1蛋白的神经元兴奋性比Rbfox1表达抑制以及对照组的神经元都显著增高,提示Rbfox1蛋白表达上调可能参与了调控神经元的兴奋性,可能参与了癫痫的发病。2.过表达Rbfox1蛋白的神经元兴奋性增高可能与SNAP-25,钠通道Na(v)1.6,NMDA受体1等和细胞兴奋性有关的蛋白表达上调有关。
【作者】文明;
【导师】晏勇;
【作者基本信息】重庆医科大学,神经病学,2014,博士
【关键词】Rbfox1;癫痫;皮质发育障碍;神经元过度兴奋;

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