鱼眼草地上部分化学成分研究

【摘要】鱼眼草(Dichrocephalaintegrifolia)为菊科(Compositae)鱼眼草属（Di-chrocephala）植物,分布于亚洲、非洲及大洋洲热带地区,具有很高药用价值。该属包括鱼眼草(Dichrocephalaintegrifolia),小鱼眼草(Dichroce-phalabenthamii)、菊叶鱼眼草(Dichrocephalachrysanthemifolia),鱼眼菊（Dichrocephalabicolor）及宽叶鱼眼草(Dichrocephalalatifolia)这五种，其中前三种植物据《中国植物志》记载是分布于我国的品种。早在《滇南本草》中有记载，药材来源为菊科植物小鱼眼草和菊叶鱼眼草的全草，名为鱼眼草。该味药材，味苦，性寒。用于治疟疾，痢疾，腹泻，口疮，疮疡，妇女白带，肝炎等。在现代《云南中草药》、《贵州药植目录》、《云南中医验方》等医药书中也有了进一步的记载。目前，该属植物中已发现了萜类、挥发油、黄酮类、甾体类等化学成分，对这些化学成分的一部分还进行了药理活性研究。为了促进该属植物的综合开发利用，寻找更多的活性成分。本课题以鱼眼草地上部分为研究对象，对其石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取部分化学成分进行了系统的分离纯化，结构确认以及药理活性筛选。目的:本研究旨在以鱼眼草地上部分为研究对象，利用硅胶柱色谱、制备薄层色谱、高效液相制备色谱以及重结晶等分离纯化技术对其进行系统研究，从而建立行之有效的单体化合物分离纯化方法，寻找新的化学成分。再应用UV、IR、MS以及一维和二维核磁图谱（1H-NMR、13C-NMR、1H-1HCOSY、HMQC、HMBC、NOESY）等现代技术完成单体化合物分子或结构简单的两组分混合物的结构鉴定。同时还可以通过活性筛选，得活性成分，用于进一步开发利用。方法:自然干燥的鱼眼草地上部分（Dichrocephalaintegrifolia)6Kg，用95%工业乙醇回流提取3次后，分别用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇萃取，浓缩得四个部分。将该四部分经硅胶柱色谱，制备薄层色谱，制备液相色谱、葡聚糖柱、大孔吸附树脂柱、重结晶以及其它分离纯化方法进一步得到单体化合物。所得化合物应用UV、IR、MS、HRMS-ESI、一维和二维核磁技术进行检测,根据得到的图谱及数据分析推测或与参考文献数据对比来确定化合物的平面结构和立体结构。最后还运用MTT比色法测定了其中几个化合物对三个人肝癌细胞系(Bel一7402,SMMC-7721,HepG2)存活率的影响,得到相关化合物抗肿瘤活性的依据。实验过程中,所用检识薄层硅胶和制备薄层硅胶都是GF254,黏合剂均是混匀的0.5-0.7%羧甲基纤维素钠溶液,薄层板都通过人工铺制而成。薄层检识常用分析方法有254nm.365nm紫外分析仪下观察暗斑和荧光;10%硫酸乙醇,香草醛浓硫酸,磷钼酸,碘蒸气显色后观察。初步分析化合物纯度采用的方法是：液相色谱下出峰单一；薄层检识在三个及三个以上展开剂系统下化合物样品斑点单一,颜色单一。结果：通过对植物鱼眼草(Dichrocephalaintegrifolia)地上部分系统分离,从中得到37个单体化合物,并对其结构进行了鉴定。由于时间的限制仅确定了其中26个化合物的结构。化合物类型有萜类、脂肪酸、甾醇及其苷类、生物碱类、苯丙素类以及挥发油。结构鉴定结果：26个化合物分别是stigmasta-7,22一dien-3-0l(1),n-tetradecoicacid(2),dichrocepholC(3),dichrocepholB(4),3一O-[6’-O-palmitoyl-β-D-glucosyl]spinasta7,22-dine(8),ergosta-6,22一diene-3,5,8-triol(12),3’一O-methyleupatorin(13),methylpheophorbideb(14),N-benzoylphenylalaninyl-N-benzoylphenylala-ninate(15),aurantiamideacetate(16),isobutylphthalate(17),,n-butylphtha-late(18),methylphaeophorbidea(20),16-hydroxycleroda-3,13-dien-15,16-olide-18-oicacid(22),eudesm-11-ene-4α,7β,9β-triol(23),stigmasta-7,22-dien-3βO-β-D-gluccside(24),1,8-terpenedio1(26),quercetin-3一O-glucos-ide(27),(1R,3S,4R,5S)-3,4-bis[[(2E)-3-(3,4-dihydroxyphenyl)-1-oxo-2-propenyl]oxy]-1,5-dihydroxy-cyclohexanecarboxylicacid(28),(1R,3R,4S,5R)-3,4-bis[[(2E)-3-(3,4-dihydroxyphenyl)-1-oxo-2-propenyl]oxy]-1,5-dihydroxy-cyclohexanecarboxylicacid(29),quercetin-3-O-rutinoside(31),kaempferol3-p-D-glucoside(32),kaempferol-3一O-rutinoside(33),3-(β-D-glucopyranosyloxy)-2-hydroxy-olean-12-ene-23,28一dioicacid,28-(glucopyr-anosyl-(1→2)-xylopyranosyl一(1→4)一glucopyranosyl)ester(35),2-hydroxy-olean-12-ene-23,28-dioicacid-3-O-β-D-glucopyranoside(36),3-(β-D-glucop-yranosyloxy)-16-methanoyl-olean-12-ene-28-oicacid,28-(glucopyranosyl-(1→4)-2-ethanoyl-xylopyranosyl-(l→4)-glucopyranosyl)ester(37)。活性筛选结果,化合物15-16及化合物23具有抑制Bel-7402,SMMC-7721和HepG2-个人肝癌细胞株增殖的活性。结论：本文对植物鱼眼草(Dichrocephalaintegrifolia)地上部分的化学成分进行了系统研究,实验结果表明,试验中运用的溶剂和方法是可行的。为了分离、纯化鱼眼草地上部分化学成分,利用了液液萃取,硅胶柱色谱,制备薄层色谱,制备液相色谱、葡聚糖柱、大孔吸附树脂柱、重结晶以及其它分离纯化方法,共得到37个化合物。通过多种波谱学手段已确定了26个化合物的结构。其中,化合物23、35和37是新化合物,化合物2,8,12-16,22,24,26,36首次从该属植物中得到,化合物3-4,18,28-29,31,33首次从鱼眼草中分离得到,化合物22立体构型确定后有可能是新的化合物。首次发现N-benzoylphenylalaninyl-N-benzoylphenylalaninate(15)对SMMC-7721和HepG2细胞株的增殖抑制活性；首次发现aurantiamideacetate(16)和eudesm-11-ene-4,7,9-triol(23)抑制Bel-7402、SMMC-7721和HepG2三个人肝癌细胞株增殖的活性。
【作者】秦芳；
【导师】史清文；
【作者基本信息】河北医科大学，药物化学，2014，硕士
【关键词】鱼眼草；色谱分离；化学成分；结构鉴定；萜类；抗肿瘤活性；

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