不同化疗模式对荷人卵巢癌裸鼠及其移植瘤的影响

【摘要】目的：利用人卵巢上皮性癌（简称卵巢癌）细胞株SKOV3建立裸鼠异种移植瘤模型，分别给予顺铂（DDP）最大可耐受剂量化疗(maximumtolerateddosechemotherapy,MTD)及顺铂低剂量节拍化疗（low-dosemetronomicchemotherapy，LDM），观察两种化疗模式对荷人卵巢癌细胞SKOV3裸鼠及其移植瘤的影响，并探讨其对乳腺癌耐药蛋白（breastcancerresistantprotein，BCRP）、肺耐药蛋白（lungresistanceprotein，LRP）、p-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）、增殖细胞核抗原Ki-67及肿瘤干细胞标记物CD133表达水平的影响。方法：1建立裸鼠异体移植瘤模型：体外培养SKOV3细胞，将1×107细胞重悬于0.2mlPBS中，接种于6-8周龄雌性裸鼠大腿外侧皮下，建立裸鼠异体移植瘤模型。2当肿瘤体积达到150mm3-200mm3时，将36只裸鼠随机分为三组，每组12只：顺铂最大可耐受剂量组（MTD-DDP组），DDP3mg/kg,1次/3日，腹腔注射，共6次；顺铂低剂量节拍化疗组（LDM-DDP组），DDP1mg/kg,1次/日，腹腔注射，共18次；对照组，等量生理盐水腹腔注射。3化疗期间观察裸鼠的一般情况（皮肤颜色、皮下脂肪含量、活动情况）和肿瘤生长状况，每3天测量裸鼠皮下移植瘤体积、记录体重及鼠粮重量，每6天采尾静脉血液进行白细胞计数（WBC）。化疗中期（自化疗当日起第9天）和化疗结束（自化疗当日起第18天）分别计算两化疗组抑瘤率。4化疗中期及化疗结束，每组分别采用戊巴比妥过量麻醉处死6只裸鼠，无菌条件下剥除裸鼠皮下移植瘤，使用WesternBlot方法检测各组移植瘤组织中P-gp、BCRP、LRP、Ki-67、CD133的表达。取出裸鼠内脏进行HE染色，观察裸鼠内脏有无微小转移灶及有无组织形态学改变。5统计方法：实验数据采用SPSS17.0统计软件处理，计量资料以均数±标准差(x±s)表示，三组以上比较采用方差分析，组间差异比较采用LSD法、DunnettT3法；两组数据比较采用t检验；以P<0.05作为有统计学差异的标准。结果：1裸鼠皮下移植瘤生长情况自化疗第1日至18日，对照组、MTD-DDP组、LDM-DDP组裸鼠皮下移植瘤处于持续增大状态，且化疗结束与化疗中期比较，各组移植瘤体积均增大（P=0.000，P=0.001，P=0.010）。但两化疗组皮下移植瘤增长速度较对照组明显减慢。化疗第6天，与对照组比较，MTD-DDP组、LDM-DDP组裸鼠皮下移植瘤增长速度明显减慢，LDM-DDP组移植瘤体积小于对照组（P=0.022），但MTD-DDP组移植瘤体积与对照组比较无统计学差异（P=0.215）。化疗7天至18天，MTD-DDP组和LDM-DDP组皮下移植瘤增长速度均明显减慢。化疗中期，MTD-DDP组、LDM-DDP组移植瘤体积均小于对照组（P=0.047，P=0.002），LDM-DDP组与MTD-DDP组移植瘤体积差异无统计学意义（P=0.158）。两组抑瘤率分别为31.32%、47.39%。化疗结束，MTD-DDP组、LDM-DDP组移植瘤体积均小于对照组（P=0.020，P=0.000），其中LDM-DDP组移植瘤体积显著小于MTD-DDP组（P=0.004）。MTD-DDP组抑瘤率为27.00%，LDM-DDP组抑瘤率为54.29%。2裸鼠一般状况及化疗副反应评估2.1裸鼠一般状况评估自化疗第1日至18日，各组裸鼠一般状况良好，未发现活动减少及便秘或腹泻。与对照组比较，MTD-DDP组、LDM-DDP组裸鼠进食量减少、皮肤变浅、皮下脂肪减少。化疗中期，MTD-DDP组、LDM-DDP组裸鼠进食量均低于对照组（P=0.001，P=0.000），LDM-DDP组裸鼠进食量与MTD-DDP组比较无统计学差异（P=0.657）。化疗结束，MTD-DDP组、LDM-DDP组裸鼠进食量均低于对照组（P=0.000，P=0.000），LDM-DDP组与MTD-DDP组裸鼠进食量差异无统计学意义（P=0.834）。2.2裸鼠化疗副反应评估自化疗第1日至18日，MTD-DDP组和LDM-DDP组裸鼠体重都出现了不同程度下降。化疗中期，MTD-DDP组、LDM-DDP组裸鼠体重均低于对照组（P=0.023，P=0.002），而LDM-DDP组裸鼠体重与MTD-DDP组比较无统计学差异（P=0.322）。化疗结束，MTD-DDP组、LDM-DDP组裸鼠体重均低于对照组（P=0.015，P=0.002），LDM-DDP组与MTD-DDP组比较裸鼠体重差异无统计学意义（P=0.399）。自化疗第1日至18日，MTD-DDP组裸鼠白细胞呈现持续下降趋势。化疗6日，对照组、MTD-DDP组、LDM-DDP组裸鼠白细胞差异无统计学意义（P=0.930，F=0.073）。化疗12日，MTD-DDP组裸鼠白细胞显著低于对照组（P=0.006），而LDM-DDP组裸鼠白细胞与对照组比较差异无统计学意义（P=0.192）；化疗18天，与对照组及LDM-DDP组比较，MTD-DDP组裸鼠白细胞显著降低（P=0.010，P=0.029）。化疗中期及化疗结束，三组裸鼠内脏均未见微小转移病灶。化疗中期MTD-DDP组有1只裸鼠出现肝细胞脂肪样变性，化疗结束有2只出现肝细胞脂肪样变性，而对照组和LDM-DDP组裸鼠内脏未见明显异常。3移植瘤组织中增殖细胞核抗原Ki-67的蛋白表达化疗中期，MTD-DDP组、LDM-DDP组均可以抑制肿瘤细胞增殖，其Ki-67蛋白表达均显著低于对照组（P=0.004，P=0.000），但LDM-DDP组Ki-67蛋白表达水平与MTD-DDP组比较差异无统计学意义（P=0.080）。化疗结束，LDM-DDP组可显著抑制肿瘤细胞增殖，其Ki-67蛋白表达显著低于对照组（P=0.003）。MTD-DDP组Ki-67蛋白表达与对照组及LDM-DDP组比较差异无统计学意义（P=0.126，P=0.079）。4移植瘤组织中肿瘤干细胞标记物CD133的蛋白表达化疗中期，对照组、MTD-DDP组、LDM-DDP组CD133蛋白表达差异无统计学意义（P=0.190，F=1.858）。化疗结束，MTD-DDP组、LDM-DDP组CD133蛋白表达均显著高于对照组（P=0.000，P=0.037），而LDM-DDP组CD133表达显著低于MTD-DDP组（P=0.011）。5移植瘤组织中耐药相关蛋白的表达5.1BCRP蛋白表达化疗中期，MTD-DDP组、LDM-DDP组BCRP蛋白表达均高于对照组（P=0.000，P=0.001），但LDM-DDP组BCRP蛋白表达水平与MTD-DDP组比较差异无统计学意义（P=0.098）。化疗结束，MTD-DDP组、LDM-DDP组BCRP蛋白表达均高于对照组（P=0.000，P=0.004）；而LDM-DDP组BCRP蛋白表达水平显著低于MTD-DDP组（P=0.001）。与化疗中期比较，化疗结束时对照组、MTD-DDP组、LDM-DDP组BCRP蛋白表达均增加（P=0.014，P=0.000，P=0.011）。5.2LRP蛋白表达化疗中期，MTD-DDP组、LDM-DDP组LRP蛋白表达均高于对照组（P=0.000，P=0.000），LDM-DDP组LRP蛋白表达与MTD-DDP组比较差异无统计学意义（P=0.060）。化疗结束，MTD-DDP组、LDM-DDP组LRP蛋白表达均高于对照组（P=0.000，P=0.003），LDM-DDP组LRP蛋白表达与MTD-DDP组比较无统计学差异（P=0.274）。5.3P-gp蛋白表达化疗中期，MTD-DDP组、LDM-DDP组P-gp蛋白表达均高于对照组（P=0.000，P=0.006），LDM-DDP组P-gp蛋白表达与MTD-DDP组比较差异无统计学意义（P=0.075）。化疗结束，MTD-DDP组、LDM-DDP组P-gp蛋白表达均高于对照组（P=0.002，P=0.038），LDM-DDP组P-gp蛋白表达与MTD-DDP组比较差异无统计学意义（P=0.171）。结论：1在累计药物剂量相同的情况下，与MTD模式比较，LDM模式抑制荷人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤生长的效果更好，而骨髓抑制更轻。2在LDM模式下，卵巢癌移植瘤中肿瘤干细胞标记物、耐药相关蛋白表达水平显著低于MTD模式，提示MTD模式较LDM模式更易使残余瘤灶中具有部分肿瘤干细胞特性且耐药相关蛋白高表达的瘤细胞富集，即残余瘤对化疗抵抗性更强，更难治疗。LDM是一种可以降低复发、提高化疗敏感性的新的有潜力的治疗模式。
【作者】张彩虹；
【导师】吴小华；
【作者基本信息】河北医科大学，妇产科学，2014，硕士
【关键词】卵巢上皮性癌；最大耐受剂量化疗；低剂量节拍化疗；多药耐药相关蛋白；苏木素-伊红染色法；蛋白印迹法；

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