食管癌组织中ZIP5基因的表达以及稳定低表达ZIP5、基因食管癌细胞系的构建

【摘要】目的：1研究在食管癌组织、癌旁组织、正常组织中ZIP5基因的表达情况，探索ZIP5基因在食管癌发展中可能的作用。2构建ZIP5基因稳定低表达的食管癌细胞系，为后续细胞水平实验和动物实验提供理论和实验基础。全面研究ZIP5基因在食管癌发生发展中的作用及机制，为食管癌的预防及靶向治疗提供新的理论基础。方法：1从食管癌患者手术切除部分取食管癌组织、癌旁组织、正常组织各30例，利用免疫组化实验比较ZIP5蛋白在食管癌组织、癌旁组织与正常组织中的表达差异；用WesternBlot实验验证ZIP5蛋白在食管癌组织、癌旁组织和正常组织中的表达差异；用实时荧光定量PCR法从mRNA水平验证ZIP5基因在食管癌组织、癌旁组织和正常组织中的表达差异。2选择有特异沉默ZIP5基因效果的siRNA序列，分子克隆携带特异序列的质粒，将其克隆入慢病毒载体质粒PSD31，包装病毒，感染食管癌细胞系KYSE170，得到稳定低表达ZIP5基因的细胞系，并用实时荧光定量PCR和WesternBlot来验证其沉默效果。结果：1免疫组化实验结果显示，在30例食管癌组织中，有28例ZIP5基因表达；在30例癌旁组织中，有13例ZIP5基因表达；在30例正常组织中，有3例ZIP5基因表达，其表达量分别为4.10±0.51、0.78±0.97、0.20±0.03，ZIP5基因在组织中的表达水平从高到底依次是：癌组织，癌旁组织，正常组织。WesternBlot实验结果显示，ZIP5蛋白在癌组织中相对表达量为3.05±0.20；在癌旁组织中相对表达量为1.78±0.92；正常组织中相对表达量为0.52±0.29，ZIP5基因在组织中的表达水平从高到底依次是：癌组织，癌旁组织，正常组织，与免疫组化结果相同；qRT-PCR结果显示：以正常组织为标准，值为1，癌组织相对表达量为14.83±4.63，癌旁组织相对表达量为4.17±0.79，可认为ZIP5基因在组织中的表达水平从高到低依次是：癌组织，癌旁组织，正常组织，与以上结果相同。2成功将携带特异序列的质粒克隆入TA载体，通过酶切及测序验证重组质粒的正确性；成功构建PSD31-ZIP5-shRNA质粒；成功包装慢病毒并构建稳定细胞系；qRT-PCR及WesternBlot检测ZIP5蛋白表达下降，ZIP5基因稳定低表达的食管癌细胞系成功建立。结论：1ZIP5蛋白在食管癌组织、癌旁组织、正常组织中表达强度明显由强到弱。2ZIP5基因稳定低表达的细胞系成功建立。
【作者】靳晶；
【导师】贺宇彤；
【作者基本信息】河北医科大学，流行病与卫生统计学，2014，硕士
【关键词】食管癌；ZIP5；RNA干扰；WesternBlot；实时荧光定量PCR；慢病毒载体；

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