棕点石斑鱼中草药免疫增强剂的筛选及其非特异性免疫增强效果研究

【摘要】近年来,海南、福建、广东等地养殖棕点石斑鱼(Epinephelusfuscoguttatus)发生了较严重的暴发性疾病,制约了其可持续健康发展。筛选和使用合适的免疫增强剂以提高水产动物的整体抗病力已成为当前水产病害预防的有效手段之一。目前,在水产养殖中常用的免疫增强剂类型包括糖类、维生素、微量元素、核苷酸、微生态制剂、中草药等,其中,中草药具有天然性、多功能性、低残留、资源丰富等优点,已成为鱼类等水产养殖动物免疫增强剂的重要来源之一。本文先采用离体外周血白细胞与中草药提取液共孵育的方法快速筛选棕点石斑鱼中草药免疫增强剂,再通过体内投喂实验,检测所筛选中草药对棕点石斑鱼非特异免疫功能的影响,获得安全高效的棕点石斑鱼中草药免疫增强剂。根据已有的文献资料,选择39种已报道对水产养殖动物具有较好免疫增强效果的中草药用于棕点石斑鱼免疫增强剂筛选。采用常温浸泡提取法分别制备39种中草药提取液,与棕点石斑鱼白细胞于体外共同孵育后,采用氮蓝四唑(NBT)还原法检测了生药量浓度为100mg/mL的39种单方中草药水提液和添加了5.0mg/mL酵母聚糖的中草药水提液对棕点石斑鱼外周血白细胞氧呼吸爆发活性的影响,再以吞噬乳胶微球法检测具有显著白细胞氧呼吸爆发增强活性中草药对白细胞吞噬活性影响。结果表明：39种单方中草药中有10种对棕点石斑鱼离体白细胞氧呼吸爆发活性显著提高15%以上,3种酵母聚糖添加组对白细胞氧呼吸爆发活性提高70%以上；筛选确定了可同时提高棕点石斑鱼离体白细胞氧呼吸爆发活性和吞噬活性的中草药3种：鸡血藤、黄柏和墨旱莲,考察投喂这3种中草药的对棕点石斑鱼的非特异免疫增强效果。选用质量(53±3)g的棕点石斑鱼共240尾,研究体外筛选的鸡血藤、黄柏和墨旱莲3种中草药对棕点石斑鱼非特异免疫功能的影响。各实验组棕点石斑鱼分别投喂含1%中草药(生药量)的饲料,对照组投喂不含中草药的基础饲料,连续投喂28d,分别于第7天、第14天、第21天和第28天时取样检测实验棕点石斑鱼的非特异性免疫活性。结果表明,棕点石斑鱼投喂鸡血藤7d时碱性磷酸酶(AKP)活性显著高于对照组；14d时红细胞数量、白细胞数量和总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性均显著高于对照组；21d时外周血白细胞吞噬活性(PA)极显著高于对照组,脾脏体指数、外周血白细胞氧呼吸爆发活性、外周血白细胞吞噬指数(PI)、溶菌酶(LSZ)活性显著高于对照组；28d时血清总蛋白含量显著高于对照组。投喂墨旱莲7d时白细胞数量极显著高于对照组,碱性磷酸酶(AKP)活性极显著高于对照组；14d时红细胞数量显著高于对照组；21d时外周血白细胞PA和PI、LSZ均显著高于对照组；28d时体重增长率、外周血白细胞氧呼吸爆发活性极显著高于对照组。投喂黄柏7d时白细胞数量极显著高于对照组,AKP活性显著高于对照组；21d时脾脏体指数极显著高于对照组,增长率显著高于对照组；28d时外周血白细胞氧呼吸爆发活性极显著高于对照组,LSZ和血清中总蛋白含量显著高于对照组。整个实验过程中,未出现实验棕点石斑鱼患病死亡,表明连续拌料投喂1%的鸡血藤、墨旱莲和黄柏对棕点石斑鱼是安全的。总之,本文采用体外外周血白细胞与中草药共孵育的方法,建立了快速筛选棕点石斑鱼中草药免疫增强剂的方法,并采用拌料投喂方法考察体外筛选出的中草药免疫增强剂的实际应用效果,根据拌料投喂实验结果,连续投喂1%鸡血藤14-21d可显著提高棕点石斑鱼的脾脏体指数、红细胞数量、白细胞数量、外周血白细胞吞噬活性(PA)、外周血白细胞吞噬指数(PI)、外周血白细胞氧呼吸爆发活性、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、溶菌酶(LSZ)活性等非特异免疫能力；连续投喂1%墨旱莲28d可极显著促进棕点石斑鱼生长,14-21d可显著提高棕点石斑鱼红细胞数量、PA和PI、LSZ活性等非特异性免疫能力；连续投喂1%黄柏21d即可显著促进棕点石斑鱼生长,21-28d可显著提高棕点石斑鱼的脾脏体指数、外周血白细胞氧呼吸爆发活性、LSZ和血清中总蛋白含量等非特异性免疫能力；表明鸡血藤、墨旱莲、黄柏对棕点石斑鱼具有较好的促生长和提高非特异性免疫功能效果,作为棕点石斑鱼中草药免疫增强剂具有良好的推广应用前景。
【作者】孙晓飞；
【导师】周永灿；郭伟良；
【作者基本信息】海南大学，水产养殖，2014，硕士
【关键词】棕点石斑鱼；中草药；免疫增强剂；筛选；非特异性免疫功能；

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