象耳豆根结线虫MeActin基因的克隆及MeHsp70基因的克隆与原核表达

【摘要】根结线虫(Meloidogynespp.)为植物根系内寄生物,可对农作物造成严重的危害。在国内已报道30多种根结线虫中,象耳豆根结线虫(M.enterolobiiYangandEisenback,1983)在海南岛已普遍分布,广东省也有发现。通过海南岛瓜类蔬菜、茄果类蔬菜和南药植物根结线虫种类鉴定,发现该种群已进一步扩散,正在显示出取代南方根结线虫Meloidogyneincognita,而成为我国热带亚热带地区最重要根结线虫种类的趋势。近年来对该线虫的研究备受关注,但对于其功能基因及功能基因组等分子生物学研究报道很少。本研究以该线虫为材料,在逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)结合cDNA末端快速扩增(RACE)技术的基础上,克隆得到M.enterolobii的Actin基因和Hsp70基因全长cDNA序列,并对其进行了生物信息学分析以及MeHsp70原核表达分析。主要研究结果如下：(1)MeActin基因全长cDNA序列为1298bp,包含一个全长1125bp的开放阅读框ORF,编码375个氨基酸,起始密码子在82位,终止密码子在1207位(GenBank登录号KF534787),与已知的其它物种的Actin具有高度的保守性,与马铃薯腐烂茎线虫Ditylenchusdestructorto和松材线虫Bursaphelenchusxylophilus的Actin同源性分别为99.20%和98.67%,与秀丽隐杆线虫Caenorhabditiselegans、人类Homosapiens相似性分别达到98.67%和97.33%。系统发育分析表明,MeActin可能是β-Actin,同时也发现了MeActin与人类的胞质Actin(β-Actin)更相似。(2)MeHsp70基因全长cDNA序列为2203bp,含有1959bp的开放阅读框,编码653个氨基酸,相对分子量为71.09kDa,具有3段Hsp70家族的签名序列,GenBank登录号KF739434。同源性分析表明,氨基酸序列与其它真核生物的Hsp70序列具有很高的相似性。MeHsp70与其他物种的Hsp70进行系统进化分析,结果显示,Hsp70的系统进化树没有很好体现物种间的亲缘关系,推测不同物种Hsp70是以Hsp70功能相似性来构建进化树。生物信息学分析显示,MeHsp70基因所编码的蛋白质以亲水性区域为主,无信号肽,无跨膜区域,为非分泌型蛋白,该蛋白的二级结构以α-螺旋和无规卷曲为主,同时MeHsp7O还存在卷曲螺旋结构。构建了pEASY-E\-MeHsp70和pET30a-MeHsp70原核表达载体,当IPTG终浓度为0.4-1.Ommol/L时,能诱导表达MeHsp70。从原核生物角度分析MeHsp70的特性,发现表达MeHsp70的原核细胞明显比对照耐受高温胁迫。
【作者】练冬梅；
【导师】陈绵才；
【作者基本信息】海南大学，分子植物病理学，2014，硕士
【关键词】象耳豆根结线虫；MeActin；MeHsp70；克隆；表达；

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