HMGB1在膀胱尿路上皮癌中的表达及其对T24细胞株生物学行为影响的研究

HMGB1在膀胱尿路上皮癌中的表达及其对T24细胞株生物学行为影响的研究

作者:师大云端图书馆 时间:2015-06-27 分类:期刊论文 喜欢:1644
师大云端图书馆

【摘要】背景:膀胱癌是泌尿生殖系统中的常见肿瘤,其中90%的组织学类型为膀胱尿路上皮癌(bladderurothelialcarcinoma,BUC)。尽管经过了多年的深入研究和探索,但BUC发生发展的分子生物学机制仍不十分明朗。目前针对BUC的各种治疗手段仍不能让人完全满意,BUC患者的总体预后仍不容乐观。因此,深入研究探索BUC发生发展相关的分子生物学机制对于提高BUC的诊疗水平和改善BUC患者的预后具有十分重大的价值。高迁移率族蛋白1(high-mobilitygroupbox1,HMGB1)是一种在真核生物的细胞中广泛表达且高度保守的非组蛋白核蛋白。近年来研究发现,HMGB1与肿瘤的无限增殖,抵抗凋亡,新生血管生成,浸润转移等生物学行为密切相关,在肿瘤的发生发展中起到了重要的作用。但目前国内外对于HMGB1在BUC中的表达研究较少,其对BUC生物学行为的影响及其在BUC发生发展中所起的作用还不清楚。目的:(1)研究HMGB1在BUC组织及细胞株中的表达情况,分析HMGB1的表达和BUC临床病理因素之间的关系。(2)探索构建靶向HMGB1的短发夹RNA(shorthairpinRNA,shRNA)表达载体并转染人BUC细胞株T24来特异性的沉默HMGB1基因的表达。(3)研究shRNA介导的RNA干扰对T24细胞HMGB1表达的影响及T24细胞生物学活性的变化。(4)初步研究HMGB1影响人BUC细胞生物学行为可能的下游作用机制。方法:(1)收集30例BUC组织及其配对的癌旁组织,采用Western-blot和实时荧光定量-PCR(real-timepolymerasechainreaction,Real-timePCR)分析BUC组织和细胞中HMGB1的表达水平,同时采用免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)检测HMGB1蛋白的表达程度和定位,分析其表达水平和BUC临床病理因素之间的关系。(2)探索构建靶向HMGB1基因的pGPU6/GFP/Neo-shRNA表达载体并采用脂质体lipofectamineTM2000转染T24细胞来特异性的沉默HMGB1的表达,采用Western-blot和Real-timePCR检测shRNA干扰序列对HMGB1表达的影响。(3)采用MTT法、流式细胞术、Transwell实验研究pGPU6/GFP/Neo-HMGB1shRNA-539表达载体转染的T24细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭和细胞周期的变化。(4)采用Western-blot和Real-timePCR检测HMGB1干扰序列转染T24细胞后核转录因子-κB(nuclearfactorkappaB/p65,NF-κB/p65)和血管内皮细胞生长因子-C(vascularendothelialgrowthfactor-C,VEGF-C)的表达水平,同时采用间接免疫荧光法(indirectimmunofluorescence)和酶联免疫吸附实验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)来分别检测NF-κB/p65在细胞内的定位情况和活性变化。结果:(1)HMGB1在BUC组织中高表达,其表达水平显著高于配对的癌旁组织;IHC结果显示HMGB1的阳性染色颗粒绝大部分位于细胞核,少部分位于细胞浆;结合患者的临床病理资料进行分析发现HMGB1的表达水平与患者的组织学分级和TNM分期呈正相关;同时,HMGB1在5637、BIU-87和T24细胞中的表达水平逐次升高,与BUC细胞的恶性程度相关。(2)实验成功的构建了特异性干扰HMGB1基因的pGPU6/GFP/Neo-shRNA表达载体并成功转染T24细胞;经检测3条shRNA均可以特异性的抑制HMGB1的表达,其中以HMGB1shRNA-539抑制效率最高。(3)特异性的干扰HMGB1基因的表达能在体外抑制T24细胞增殖、迁移、侵袭能力并诱导细胞周期G0/G1期迟滞和细胞凋亡。(4)HMGB1干扰序列转染T24细胞后NF-κB/p65和VEGF-C的表达水平下调;同时NF-κB/p65的核转位减少活性降低。结论:(1)HMGB1的表达水平在BUC组织和细胞中明显增高,且与BUC的组织学分级和TNM分期正相关,HMGB1可能与BUC的发生发展密切相关。(2)特异性的下调T24细胞HMGB1的表达可以显著抑制其增殖、迁移、侵袭能力并诱导细胞周期G0/G1期迟滞和细胞凋亡,HMGB1可以作为BUC基因治疗的一个潜在靶点。(3)特异性的下调T24细胞HMGB1基因的表达可以引起细胞中NF-κB/p65和VEGF-C的表达下调,进而抑制NF-κB/p65的活性和核转位,提示HMGB1对VEGF-C的调节可能是由NF-κB通路来实现的。图25幅,表35个,参考文献135篇。
【作者】黄智超;
【导师】赵晓昆;
【作者基本信息】中南大学,临床医学,2014,博士
【关键词】高迁移率族蛋白1;膀胱尿路上皮癌;RNA干扰;生物学行为;核转录因子-κB;血管内皮细胞生长因子-C;

【参考文献】
[1]杨春妍.内蒙古城乡基本公共文化服务均等化问题研究[D].内蒙古大学,行政管理,2013,硕士.
[2]陈德军,张玉民,陈绵云.系统云灰色宏观调控预测模型及其应用研究[J].控制与决策,2005,05:553-556+588.
[3]于猛.冻融—酶法相结合的生物质预处理研究[D].陕西科技大学,生物化工,2013,硕士.
[4]沈秋莲.初中思想品德课教学中的生命教育研究[D].曲阜师范大学,教育(专业学位),2013,硕士.
[5]苏韦.暂予监外执行制度研究[D].安徽大学,诉讼法学,2014,硕士.
[6]孟超峰.巢湖地区坡耕地保土截流措施效应研究[D].华中农业大学,土壤学,2014,硕士.
[7]柯文涌.副现象论在当代心灵哲学的发展路径及其争鸣[D].华中师范大学,马克思主义哲学,2014,硕士.
[8]黎煜.带次模特性的仓库选址问题研究[D].北京交通大学,2012.
[9]许莉.文化创意产业园区投资决策及运营模式研究[D].北京交通大学,2012.
[10]朱莹,王伟光,陈斯斯,张依姗.浙江衢州市衢江区“美丽乡村”总体规划编制方法探讨[J].规划师,2013,08:113-117.
[11]张侃健,冯纯伯,费树岷.应用LMI设计鲁棒严格正实传递函数[J].控制与决策,2000,01:119-121.
[12]许文俊.中移动武汉分公司绩效考核优化研究[D].华中科技大学,工商管理,2013,硕士.
[13]李广新.国有商业银行核心竞争力研究[D].西南财经大学,产业经济学,2013,博士.
[14]杨小龙.基于ATmega128单片机的全自动内窥镜清洗消毒机的设计与实现[D].成都理工大学,电路与系统,2013,硕士.
[15]丁红枫.论控辩平等及我国刑事诉讼中辩护律师的诉讼地位和诉讼权利及其保障[D].苏州大学,法律,2003,硕士.
[16]程菲.数据仓库技术在电信网故障管理中的应用研究[D].华中科技大学,2004.
[17]张婷婷.组织运动二尖瓣环位移技术对冠心病患者左心室收缩功能的评价[D].山西医科大学,影像医学与核医学,2013,硕士.
[18]张文芳.医药流通企业信息系统的分析与设计[D].山东大学,软件工程(专业学位),2012,硕士.
[19]梁登科.大学生就业观教育研究[D].河南农业大学,思想政治教育,2012,硕士.
[20]武莉莉.氨基酸衍生物构筑配合物及其性能表征[D].河北师范大学,无机化学,2012,硕士.
[21]闫光辉,何瑞春.DW及OLAP在现代企业MIS中的应用研究[J].兰州铁道学院学报,2002,01:20-23.
[22]王颖.我国农村寿险市场发展中存在的问题及对策[D].中南林业科技大学,农村与区域发展,2013,硕士.
[23]雷文文.基于贝叶斯理论的AVO地震参数叠前反演方法研究[D].中国石油大学(华东),固体地球物理,2012,硕士.
[24]林俊潜.基于神经网络和小波变换的语音识别系统研究[D].广东工业大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[25]陈星辰.名老中医米逸颖治疗102例乳腺癌的处方用药特点[D].北京中医药大学,中医内科学,2014,硕士.
[26]牛亚丽.桑沟湾滤食性贝类碳、氮、磷、硅元素收支的季节变化研究[D].浙江海洋学院,海洋生物学,2014,硕士.
[27]毕德鹏.光明日报版面变革研究[D].黑龙江大学,新闻学,2013,硕士.
[28]余茜.Expectancy Norms in the Trans-editing of Online English Image News[D].西安外国语大学,MTI翻译,2014,硕士.
[29]李瑞庆,方陈,夏清,魏学好.地区间电力市场互联互通相关问题(一)基本模型与社会福利分析[J].电力系统自动化,2009,22:29-33+65.
[30]李刚.SW公司绩效考核方案优化设计[D].山东大学,工商管理(专业学位),2013,硕士.
[31]汤立宽.基于感阻理论的暖通空调水管网动态特性研究[D].华中科技大学,制冷及低温工程,2013,硕士.
[32]吴杰洲,刘艾琼.株冶建立健全能源数据5级确认体系[J].冶金自动化,2003,06:29.
[33]蒋春秀.中国居民消费率变动因素研究[D].上海社会科学院,政治经济学,2012,硕士.
[34]钟庆捷.提高张唐铁路工程项目物资采购管理建议[D].西南交通大学,工业工程,2012,硕士.
[35]徐龙.基于MBD的检验方法研究[D].西南交通大学,机械工程,2014,硕士.
[36]王富忠,秦岩,黄志雄,王雁冰,贾金荣.纳米材料改性树脂基耐烧蚀材料研究新进展[J].材料导报,2012,13:93-96.
[37]王姝华,钟云飞.数据挖掘在移动通信业大客户离网预测中的应用[J].江苏通信技术,2004,03:1-4.
[38]谢芹.完善我国房地产税制模式研究[D].华中师范大学,政治经济学,2013,硕士.
[39]许传鸿.井底煤炭贮运系统数学建模及应用分析[J].煤炭工程,2014,10:184-187.
[40]黄道祥.基于竞争优势培育的企业市场营销能力建设研究[D].武汉纺织大学,工商管理,2014,硕士.
[41]王凤梅.鄂尔多斯中学学生英语写作错误分析[D].内蒙古师范大学,教育(专业学位),2013,硕士.
[42]李亘煊.OFDM系统中的调度算法研究[D].河北工程大学,计算机应用技术,2012,硕士.
[43]郭佩佩.氮硫掺杂石墨烯的微生物制备及在痕量重金属同步检测中的应用研究[D].华中科技大学,2013.
[44]钱青华.民事检察监督范围研究[D].辽宁大学,诉讼法学,2012,硕士.
[45]何静.新一佳超市员工高离职率原因及对策研究[D].湖南师范大学,工商管理(专业学位),2013,硕士.
[46]杨昆安.新型热膨胀补偿装置[J].城市公用事业.1997(02)
[47]李峰.基于改进时空特征的行为识别研究[D].华侨大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[48]穆萍.生物氧化提金废液中砷铁回收及铁的高值化利用[D].东北大学,冶金物理化学,2010,硕士.
[49]胡亦优.从“思”到“诗”[D].湖南师范大学,中国现当代文学,2013,硕士.
[50]罗慧,万迪昉,张鹏,赵海峰.超竞争环境信息扫描系统模型及其在XA电信市场的分析和应用[J].系统工程,2003,03:27-33.

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