白头翁醇提物对TNBS诱导大鼠结肠炎中性粒细胞弹性蛋白酶作用的影响

【摘要】目的：探讨白头翁醇提物对三硝基苯磺酸（trinitro-benzen-sulfonicacid,TNBS）诱导大鼠结肠炎中性粒细胞弹性蛋白酶（Neutrophilelastase，NE）作用的影响。方法：建立大鼠结肠炎模型，SD大鼠28只，分为TNBS诱导大鼠结肠炎模型组（TNBS模型组，n=10）、白头翁醇提物治疗组（白头翁组，n=10）、正常对照组（正常对照组，n=8）。TNBS诱导大鼠结肠炎模型：SD大鼠予禁食不禁饮24小时，2%戊巴比妥钠注射液（2.3ml/kg）腹腔注射麻醉大鼠后，TNBS模型组、白头翁组分别用一直径约2mm、长约12cm的用石蜡油润滑的硅胶管由肛门缓慢插入约8cm左右，以含80mg/kgTNBS的等体积50%乙醇溶液约0.85ml轻轻注入结肠，数秒内灌完，使肛门向上呈45°倾斜，持续约3-5分钟，防止药液倒流，促进吸收，然后保持大鼠平躺状态，待其自然清醒，放回饲养笼中。正常对照组在相同的麻醉条件下予以同等量生理盐水注入作为对照，其余过程均与前相同。结肠炎造模成功后，正常对照组、TNBS模型组每只每天均用1ml的蒸馏水灌肠一次，持续7天；白头翁组各只大鼠1-7天之内每天用白头翁醇提物灌肠，白头翁醇提物用量按2g/kg用蒸馏水配制成1ml。各组大鼠正常饲养，给予自由饮水和同样颗粒装食物。每天观察各组大鼠的活动、体重及大便性状变化等情况。于第8天对各组行2%的戊巴比妥钠麻醉，待麻醉满意后，取眼眶内眦静脉血ELISA法测定血浆D-乳酸、NE及血清TNF-α、IL-8。然后断颈处死所有大鼠，取下整段结肠并纵向剪开，用生理盐水冲洗结肠内污物并观察整段结肠有无溃疡、有无充血水肿及活动性出血等；每只大鼠取相同部位结肠组织，分成两部分，一部分取长约2cm，用福尔马林液固定，用于HE染色，同时进行疾病活动指数(DAI)和病理组织学损伤评分；另一部分标本用3%的戊二醛固定型电子透镜观察结肠组织超微结构改变情况。结果：（1）一般情况：大鼠动物造模24小时后出现精神萎靡,活动和摄食较前明显减少，对外周刺激反应减弱，体质量逐渐下降，部分大鼠出血腹泻伴肉眼便血或粪便隐血阳性。TNBS模型组前4天腹泻较重，毛发蓬松，质脆，后3天逐渐腹泻逐渐缓解，食量和体质量稍有增加；白头翁组与TNBS模型组相比，饮食、活动逐渐增多，体质量缓慢增加,精神好转，腹泻逐渐减轻,症状明显改善，大便较成形，血便多表现为隐血阳性，体质量减轻不明显。在组织学上模型组结肠黏膜上皮坏死脱落，黏膜、黏膜下和基层可见淋巴细胞、浆细胞浸润，腺体断裂、结构紊乱，杯状细胞丢失，隐窝脓肿形成，可见多个溃疡，溃疡深达固有肌层。白头翁组光镜下可见黏膜下炎症细胞浸润少，溃疡多累及黏膜下层，腺体结构改善，溃疡面被增生的边缘上皮细胞覆盖，肉芽组织纤维化改变。（2）疾病活动指数（DAI）:TNBS模型组、白头翁组和正常对照组DAI分别是8.80±3.04、5.10±1.85和1.00±0.74，组织学损伤评分分别为4.00±2.16、2.70±1.15和0.37±0.51，与正常对照组比较差异均具有显著性（P<0.05）。（3）血清中TNF-α、IL-8和血浆中NE、D-乳酸含量：TNBS诱导大鼠结肠炎后，血清TNF-α水平、IL-8升高、血浆中NE、D-乳酸水平升高，但经白头翁醇提物处理后，血浆NE水平、血清TNF-α水平、血清IL-8水平和D-乳酸水平均降低（P<0.05）。（4）透射电镜下可见TNBS模型组肠绒毛稀疏，排列不规整，线粒体肿胀，粗面内质网扩张，核糖体丢失并且有空泡形成。偶见细胞核染色质边集。白头翁组与TNBS模型组比较略有改善，与正常组比较仍有差异。结论：白头翁醇提物对IBD具有明显的抗炎作用，其可能的作用机制是：通过白头翁醇提物对NE释放的抑制，进一步抑制炎症介质级联反应，达到抗炎效果。
【作者】董辉；
【导师】张文远；
【作者基本信息】川北医学院，内科学，2014，硕士
【关键词】三硝基苯磺酸；NE；TNF-α；IL-8；血浆D-乳酸；肠道黏膜屏障；

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