miR-139-5p在高糖内皮细胞损伤中的作用

【摘要】目的：探讨miR-139-5p在高糖诱导下内皮细胞中表达的变化及其对内皮细胞功能的调控作用。方法：1.体外培养的人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcells,HUVECs),利用microRNA实时定量PCR的方法检测持续的高糖(30mmol/L)刺激下miR-139-5p表达水平在7天内的变化情况,与在正常糖(5mmol/L)下培养的HUVECsmiR-139-5p表达水平对比；2.通过miRNAmimic或niRNAInhibitor外源性的上调或下调HUVECsmiR-139-5p表达水平,用划痕实验和tranwell小室实验检测迁移能力,用CCK-8试剂盒检测增殖能力,通过检测HUVECs的Caspase3活性检测凋亡情况,并用体外成管试剂盒检测成管能力；3.通过WesternBlot方法检测IGF-1R、pIGF-1R、Akt、pAkt、VEGFA、Erk1/2及pERKl/2蛋白表达水平,以确定miR-139-5p的靶蛋白及其信号通路。结果：1.miR-139-5p表达随高糖作用时间的延长而增高(P<0.05),至第7天时其表达升高明显,是正常对照组的6倍。而在等渗的甘露醇组未观察到miR-139-5p表达水平变化(P>0.05)。2.细胞划痕实验和transwell小室迁移实验显示,niR-139-5p高表达时细胞迁移能力被抑制(P<0.05),而抑制niR-139-5p表达时细胞迁移增强(P<0.05)；上调miR-139-5p表达促进细胞增殖(P<0.05)；miR-139-5p表达上调48小时对内皮细胞凋亡无明显影响(P>0.05),而96小时后显示内皮细胞凋亡增加(P<0.05),下调miR-139-5p表达内皮细胞凋亡降低(P<0.05)：miR-139-5p对内皮细胞排列成线长度、形成血管芽数量等检测内皮细胞成管能力的指标均有抑制作用(P<0.05)。3.外源性的上调或下调miR-139-5p后,IGF-1R蛋白表达均随之下降或升高；IGF-1R信号通路下游的Akt水平变化不明显(P>0.05),而其活化形式pAkt蛋白表达随之变化(P<0.05)；miR-139-5p对胞内VEGF表达有抑制作用(P<0.05)；但rniR-139-5p表达改变时,ERK1/2及pERK表达均无明显变化(P>0.05)。结论：人脐静脉内皮细胞在高糖作用下miR-139-5p表达增加,miR-139-5p通过抑制GF-1R/Akt/通路及VEGF的表达,使内皮细胞迁移、增殖能力减弱,凋亡增加,从而导致其成管功能受损。因此,高糖促进miR-139-5p表达上调可能是介导糖尿病内皮功能损伤的重要因素。
【作者】申睿婷；
【导师】莫朝晖；
【作者基本信息】中南大学，内科学，2014，博士
【关键词】高糖；miR-139-5p；内皮功能；IGF-1R；

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