团头鲂源嗜水气单胞菌流行病调查及致病性、耐药性研究

【摘要】致病性嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)是我国水产养殖中的常见病原菌,属于条件致病菌,可引起多个养殖品种发生季节性、爆发性传染病。近年来,嗜水气单胞菌对包括团头鲂在内的多个淡水养殖品种的危害日益严重,造成了严重的经济损失。团头鲂(Megalobramaamblycephala)是我国特有的草食性养殖品种,具有良好的市场需求。嗜水气单胞菌引起的细菌性出血病对团头鲂养殖的危害最为严重。本研究主要对湖北省、江苏省爆发嗜水气单胞菌的团头鲂主养地区进行流行病调查,研究嗜水气单胞菌对团头鲂的致病力和耐药性,分析不同地区分离菌株的特性和差异性,主要研究结果如下：1.湖北、江苏两省团头鲂养殖地区嗜水气单胞菌流行病调查2012年7月-2012年9月,对湖北、江苏两省爆发出血病的8个团头鲂养殖地区流行病学进行调查,并鉴定了病原菌为致病性嗜水气单胞菌。调查结果表明,嗜水气单胞菌引起的疾病,发病快,传播迅速,发病初期不易察觉,病情难以控制,容易引发大面积病害的爆发,发病率在65%以上,死亡率一般在30%以上,造成的直接经济损失20%-35%,是团头鲂养殖过程中危害最为严重的病原菌。7月-9月是疾病爆发的高峰期,水温一般在25℃以上。由于养殖水体水质恶劣,在高温条件下,嗜温性的嗜水气单胞菌大量滋生,同时养殖密度大和人工操作的不当导致鱼体的健康受损,鱼体自身免疫机能下降等,导致机体容易感染嗜水气单胞菌,诱发大面积病害的爆发。2.嗜水气单胞菌致病力的研究在分离的嗜水气单胞菌菌株中挑选出8株菌,作为研究对象,对嗜水气单胞菌5种主要毒力基因：气溶素基因(aerA)、丝氨酸蛋白酶基因(ahpA)、溶血素基因(hlyA)、肠毒素基因(altA)、抗金属蛋白酶基因(astA),运用PCR扩增技术检测其携带率；采用倍比稀释法对嗜水气单胞菌培养上清的溶血和溶蛋白效价进行检测；根据急性毒性试验法测定菌株对团头鲂的半数致死剂量(50%lethaldose,LD50)。实验结果表明,检测的毒力基因在分离菌株中分布广泛,携带率分别为100%(8)、75%(6/8)、87.5%(7/8)、75%(6/8)、100%(8/8),E6、X22分别缺少ahpA、altA基因和ahpA、hlyA、altA基因；6株均携带上述5个毒力基因的菌株,其中有5株菌的溶血价和溶蛋白效价均达到最高的1：128,W25为1：128、1：64,E6和X22分别是1：64、1：64和1：32、1：64；上述6株菌的LDso值在5.0×105～1.0×106cfu/ml之间,E6和X22的LDso值分别为2.4×106cfu/ml和4.0×106cfu/ml。通过比较菌株毒力基因的分布和培养上清的溶血、溶蛋白效价以及对团头鲂的半致死率,可以发现所检测的毒力基因对菌株的致病力密切相关,其中气溶素基因(aerA)、丝氨酸蛋白酶基因(ahpA)、溶血素基因(hlyA)与菌株致病力具有显著相关性,肠毒素基因(altA)、抗金属蛋白酶基因(astA)对菌株致病力的影响相对较小。3.嗜水气单胞菌耐药性的分析研究为了了解不同养殖区分离菌株对抗菌药物的耐药情况,选取25种常见的抗生素,采用药敏试验纸片扩散(K-B)法检测挑选的8株菌的耐药性。实验结果表明,8菌株对各类抗生素的耐药性总体上基本一致,对青霉素类药物均表现为高度耐药,对第三代和第四代头孢类药物均表现高度敏感,对于氨基糖苷类、氟喹诺酮类、磺胺类、四环素类药物,各地区的分离呈现不同程度的耐药性。这主要与药物自身特性、药物的依赖程度和用药的时间长短有关。对于某些具体药物,其耐药性和耐药趋势具有一定的差异。菌株X22的耐药情况最为严重,与其他菌株具有显著差异,可能主要与当地的养殖环境和过度使用抗菌药物有关。菌株W2的耐药率虽然较低,但耐药趋势明显,在选择防治药物时需要重点关注。对湖北省分离的5株菌和江苏省分离的3株菌进行比较,分析结果表明,对先锋霉素V、卡那霉素、恩诺沙星、环丙氟哌酸、四环素、新生霉素的耐药性两省分离菌差异显著。江苏省分离菌对先锋霉素V、卡那霉素、新生霉素高度敏感,而湖北省分离菌则呈现一定程度的耐药性；江苏省分离菌对恩诺沙星、四环素的耐药程度则显著高于湖北省分离菌。对于新生霉素,湖北省分离菌表现出的耐药趋势更加明显,主要是由于两省在药物选择以及使用方式不同,导致了嗜水气单胞菌耐药性的选择差异。
【作者】陈婷婷；
【导师】王卫民；
【作者基本信息】华中农业大学，水产养殖，2014，硕士
【关键词】嗜水气单胞菌；流行病学；毒力基因；致病力；药敏特性；

【参考文献】
[1]李莹莹.苹果收获机器人果树枝干信息获取技术研究[D].南京农业大学,农业电气化与自动化,2012,硕士.
[2]李春艳.基于分层多域监控体系结构的移动代理迁移策略研究[D].沈阳理工大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[3]汤轶伟,魏立巧,李译,兰建兴,王硕,励建荣,厉月桥.食品中塑化剂残留检测技术最新研究进展[J].食品工业科技,2013,22:348-354.
[4]江浴阳.跨国公司内部贸易及对我国企业国际化影响的研究[D].华东理工大学,国际商务（专业学位）,2014,硕士.
[5]陈岳堂.生态校园规划设计研究与应用[D].湖南农业大学,种植,2003,硕士.
[6]顾忠伟.灰色挖掘及其在证券分析中的应用研究[D].浙江大学,技术经济与管理,2003,硕士.
[7]钟振宇.超高层建筑风重耦合效应及等效静力风荷载研究[D].浙江大学,结构工程,2014,博士.
[8]刘琴.试论市场角度下科普影视的传播策略[D].天津大学,科学技术哲学,2004,硕士.
[9]郑雄柳.亚硝酸盐和氨氮对颗粒化EBPR系统影响机制研究[D].浙江工商大学,环境工程,2014,硕士.
[10]梁凤.基于硼酸氧化方法构建新型生物传感器[D].长春理工大学,2013.
[11]韩春芬.安徽少儿出版社畅销书封面设计风格调查报告[D].安徽大学,出版,2014,硕士.
[12]王伊蕾.农产品供应链辅助决策支持系统的研究与设计[D].山东师范大学,2004.
[13]孙文.大众文化视域下后羿形象研究[D].河北师范大学,文艺学,2013,硕士.
[14]陈佑星.微型质谱仪电子源及分析器的研究[D].华东理工大学,动力机械及工程,2014,硕士.
[15]陈建瑜.中职学校创业教育“3+2”模式研究[D].广东技术师范学院,职业技术教育学,2014,硕士.
[16]高乐.云南傣族织锦纹样与织造工艺研究[D].江南大学,设计艺术学,2012,硕士.
[17]王鹏.基于FPGA的实时视觉跟踪系统的研究[D].中北大学,测试计量技术及仪器,2013,硕士.
[18]顾裕丹.内涵体pH敏感的紫杉醇前药胶束纳米粒的设计及应用[D].苏州大学,高分子化学与物理,2013,硕士.
[19]孙春华.立体视图点子质地对立体视检查的影响[D].青岛大学,眼科学,2004,硕士.
[20]刘世荣.沙棘对中国亚湿润干旱区杨树人工林生长与生产力的影响(英文)[J].植物生态学报,2000,02:169-174.
[21]康明才,于明涛,陈建业,王赞基.基于裂芯式可控电抗器双调谐滤波器研究[J].电力系统自动化,2005,15:53-57.
[22]宋海乔.成人与儿童流行性乙型脑炎MRI对比分析及早期扩散成像研究[D].河南科技大学,医学（专业学位）,2014,硕士.
[23]彭莎莎.汉语存现句任务型教学设计[D].山东大学,汉语国际教育（专业学位）,2012,硕士.
[24]盖晓晨.飞秒激光微加工的系统建立及工艺研究[D].哈尔滨工业大学,机械工程,2013,硕士.
[25]潘帅.纸透明度在书籍设计中的应用研究[D].山东工艺美术学院,艺术设计,2013,硕士.
[26]沈骏.基于行为金融学的股指期货投资者行为研究[D].西南财经大学,金融学,2013,博士.
[27]陈月.我国企业年金制度的运行与完善研究[D].东北师范大学,社会保障学,2012,硕士.
[28]郝文涛.天津建工集团二建公司国家住宅产业化基地发展战略研究[D].天津大学,工商管理,2004,硕士.
[29]马庆祥.知识创新管理观研究[D].吉林大学,2005.
[30]王芹.小学德育工作中存在的问题及对策[D].鲁东大学,学科教学（专业学位）,2013,硕士.
[31]宋东颖.纳米活性炭吸附丝裂霉素对人肝癌Huh-7肿瘤干细胞抑制作用的研究[D].吉林大学,生物医学工程,2013,硕士.
[32]王思蕴.模块化多电平变流器控制方法的研究[D].浙江大学,2013.
[33]欧爱萍.傅译《约翰·克利斯朵夫》与文学翻译基础理论应用研究[D].南京师范大学,法语语言文学,2012,硕士.
[34]蒋南云,葛红玉,方叶祥,孙玉玲.基于Flexsim的随机混流装配线平衡设计与仿真[J].组合机床与自动化加工技术,2014,12:128-130+134.
[35]吴建广.我国农村小额人身保险制度研究[D].天津财经大学,金融学,2012,硕士.
[36]王昭辉.道路工程项目风险管理模式研究[D].中南林学院,森林工程,2004,硕士.
[37]金鑫,池清华,刘康玲,梁军.对角CARIMA模型抗扰约束广义预测控制[J].化工学报,2014,04:1310-1316.
[38]郭静.甲酸—甲酸钠混合燃料体系氧化活性影响因素的研究[D].山东大学,物理化学,2013,硕士.
[39]李守鹏.浅析我国船舶优先权与海事赔偿责任限制[D].中国政法大学,法律,2013,硕士.
[40]杜丽娜.乳腺癌化疗患者应用积极认知行为治疗的对照研究[D].黑龙江中医药大学,护理学,2013,硕士.
[41]李凌冬.杭长客运专线覆盖型岩溶路基注浆加固效果检测与稳定性分析[D].西南交通大学,地质工程,2014,硕士.
[42]李佳雯.马歇尔公民身份理论及其对中国构建和谐社会的启示[D].哈尔滨工业大学,马克思主义理论,2013,硕士.
[43]肖翔,权忠光.企业价值评估指标体系的构建[J].中国软科学,2004,10:83-87.
[44]郑雯.“媒介化抗争”：变迁、机理与挑战[D].复旦大学,新闻学,2013,博士.
[45]曾苗.于时域频域特征分析的倒装芯片缺陷检测研究[D].华中科技大学,械电子工程,2013,硕士.
[46]袁晓征.基于细胞神经网络的逻辑函数设计与实现[D].南京航空航天大学,测试计量技术及仪器,2013,硕士.
[47]苗艳.罗伯特·弗罗斯特自然诗的生态研究[D].山东大学,英语语言文学,2012,硕士.
[48]陈传雨.负载型纳米Au催化选择还原二硝基苯类化合物研究[D].复旦大学,化学工程,2012,硕士.
[49]涂剑成,赵庆良,杨倩倩.东北地区城市污水处理厂污泥中重金属的形态分布及其潜在生态风险评价[J].环境科学学报,2012,03:689-695.
[50]贾利.痛灵汤联合阿片类止痛药物治疗气滞血瘀型中重度癌症疼痛的临床观察[D].黑龙江中医药大学,中医学（专业学位）,2013,硕士.